论文部分内容阅读
背景精神分裂症是一组伴有感知、思维、情感、意志、行为等多方面障碍的疾病。脑白质由被髓鞘包覆的神经轴突组成,控制着神经元共享的讯号,协调脑区之间的正常运作。精神分裂症脑白质损伤导致的功能和结构连接缺陷已在大量研究中被证实。随着精神疾病的免疫研究发展,孕期感染被认为是精神分裂症的高危因素。孕期感染可能会通过影响白质的完整性和正常生物学功能而导致精神分裂症。目的通过制备孕期感染聚肌胞苷酸(PolyI:C)所致精神分裂症模型大鼠,比较对照组、模型组、干预组仔鼠8周时的行为改变和脑白质改变,分析行为异常与脑白质变化,探讨孕期感染PolyI:C所致精神分裂症模型大鼠行为异常和脑白质变化之间关系。方法1选择12-14周龄的SPF级雌鼠35只、雄鼠5只,育种。2把成功受孕的30只孕鼠分为2组,其中20只在怀孕第9天(G9)给予尾静脉注射10mg/kg的PolyI:C注射液,为PolyI:C组；余下10只于G9给予注射等体积0.9%生理盐水,为盐水组。尾静脉注射3小时后两组随机各取6只动物作为模型评估,尾静脉取血采用ELISA试剂盒检测孕鼠血清炎性因子白介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子α (TNF-α)的蛋白质水平,确定注射效果。注射后30只孕鼠完成妊娠。3PolyI:C组仔鼠生长至离乳时(21日龄)随机分为两组,一组仔鼠自然生长至8周,即为模型组；另一组仔鼠自离乳时开始每日右侧腹腔注射10mg/kg的喹硫平注射液,为干预组,注射至8周结束；对照组仔鼠自然生长至8周。48周龄时对正常对照组、模型组、干预组三组仔鼠进行行为测定,采用惊反射测定仪、被动规避仪、主动规避仪检测前脉冲抑制(Pre-pulse inhibition, PPI)、被动规避和主动规避,比较各组动物在行为上的差异。58周龄时采用免疫组织化学技术检测对照组、模型组、干预组仔鼠胼胝体髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein, MBP)蛋白的表达；采用神经髓鞘坚固蓝染色(Luxol Fast Blue, LFB)技术对三组仔鼠胼胝体进行染色；采用半定量聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)技术检测三组仔鼠髓鞘相关糖蛋白mRNA (myelin associated glycoprotein, MAG)、2’-3’环核苷酸-3’-磷酸二酯酶mRNA (2’,3’-Cyclic Nucleotide3’-Phosphodiesterase, CNPase)、髓磷脂/少突神经胶质细胞糖蛋白mRNA (myelin oligodendrocyte glycoprotein, MOG)的表达。6实验数据用SPSS13.0软件包进行统计分析。根据资料特点选择统计方法,结果以均数±标准差(x±s)表示。多组计量资料采用单因素方差分析或多因素方差分析,多次测量的计量资料应用重复测量数据的方差分析,两组间均数比较采用独立样本t检验,多重比较采用最小显著差检验,P<0.05为差异有显著性。结果130只孕鼠在孕21-22天生产仔鼠,共产仔鼠298只,全部成活,进入实验,雌雄比例为1：1,各组之间差异无统计学意义(P<0.05)。2PolyI:C组和盐水组的孕鼠血清中IL-10(r=-63.641, P=0.004)、TNF-α (t=-31.061,P=0.002)的蛋白质水平均有显著性差异,PolyI:C组高于盐水组。3PPI结果显示三组大鼠PP2测试结果差异具有显著性(F=12.252,P=0.000)模型组小于对照组和干预组(P=0.000,P=0.005),对照组与干预组无显著性差异；PP4结果差异有显著性(F=6.669,P=0.006),模型组小于对照组和干预组(P=0.000,P=0.012),对照组和干预组之间差异无显著性；PP8测试结果差异有显著性(F=12.804,P=0.000),模型组小于对照组和干预组(P=0.000,P=0.034),干预组小于对照组(P=0.004)。性别差异无统计学意义。4被动规避显示三组大鼠T1结果差异具有显著性(F=16.765,P=0.000),模型组高于对照组和干预组(P=0.006,P=0.000),对照组与干预组之间差异无显著性；T2结果差异有显著性(F=55.039,P=0.000),模型组低于对照组和干预组(P=0.004,P=0.009),对照组与干预组之间差异无显著性。性别差异均无显著性。5在整个测试周期内,三组大鼠条件反射次数之间的差异具有显著性(F=42.336,P=0.000),测量时间和组别之间有明显的交互效应(F=8.792,P=0.000)；测量时间和性别之间无明显的交互效应；总条件反应次数之间差异有显著性(F=8.091,P=0.004),模型组小于对照组和干预组(P=0.005,P=0.000),干预组和对照组之间差异没有显著性；三组大鼠总条件反应率之间差异有显著性(F=11.158,P=0.000),模型组小于对照组和干预组(P=0.001,P=0.000),干预组和模型组之间差异没有显著性。三组性别间差异均无显著性。6三组大鼠胼胝体MBP免疫组化结果和LFB染色结果差异均无显著性(F=0.648,P=0.823; F=0.611, P=0.509)。三组性别间差异均无显著性。7三组大鼠模型胼胝体MAGmRNA相对表达量差异有显著性(F=8.519,P=0.001),模型组高于对照组和干预组(P=0.001,P=0.000),对照组和干预组相比差异无统计学意义；三组大鼠胼胝体MOGmRNA相对表达量差异有显著性(F=12.492,P=0.000),模型组低于对照组和干预组(P=0.005,P=0.001),对照组和干预组相比差异无统计学意义；三组子代大鼠胼胝体CNPmRNA差异有显著性(F=8.047,P=0.001),模型组低于对照组和干预组(P=0.006,P=0.001),对照组和干预组相比差异有统计学意义(P=0.000)。结论1孕期感染PolyI:C导致子代出现行为异常和认知功能受损；2抗精神病药喹硫平可改善仔鼠行为异常和认知功能损伤；3孕期感染的PolyI:C精神分裂症模型成年期大鼠脑白质相关基因差异表达。