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目的：双硫仑(DSF)作为抗酗酒药物已经有六十多年的临床应用,近几年的研究发现,双硫仑螯合二价金属阳离子后有选择性抗肿瘤的活性,然其作用机制未明。氯通道作为最重要的阴离子通道,参与细胞的增殖、凋亡、周期调控等生理及病理生理过程。我们前期研究表明,Cl C-3氯通道在鼻咽癌细胞和正常鼻咽上皮细胞中存在差异性的表达,提示氯通道可作为肿瘤诊断和干预的潜在新靶标。本实验基于双硫仑/铜(DSF/Cu)高效低毒的抗肿瘤活性,探究DSF/Cu是否具有选择性诱导鼻咽肿瘤细胞凋亡的作用,从氯通道角度探索DSF/Cu高选择性抗肿瘤作用的潜在新靶点,为研发以Cl C-3氯通道为靶向分子的抗肿瘤药提供实验依据。方法:以人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)和人永生化正常鼻咽上皮细胞(NP69-SV40T)为研究对象,1)流式细胞术检测DSF/Cu诱导CNE-2Z细胞和NP69-SV40T细胞的凋亡率;2)原子力显微镜(AFM)观察DSF/Cu诱导CNE-2Z细胞和NP69-SV40T细胞表面超微结构的变化;3)采用si RNA沉默技术下调CNE-2Z细胞Cl C-3氯通道蛋白的表达;4)荧光显微镜和流式细胞术检测CNE-2Z细胞中Cl C-3 si RNA的转染效率;5)Western blot技术检测CNE-2Z细胞和NP69-SV40T细胞中Cl C-3氯通道蛋白的表达水平;6)全细胞膜片钳技术记录不同条件下细胞膜上氯电流。结果:1.DSF/Cu浓度依赖性、时间依赖性地诱导CNE-2Z细胞凋亡,对NP69-SV40T细胞的影响较小。2.通过原子力显微镜观察对比CNE-2Z细胞和NP69-SV40T细胞表面超微结构的四个参数——核区高度、宽度、均方粗糙度、平均粗糙度可知:DSF/Cu对CNE-2Z细胞的作用明显强于NP69-SV40T细胞;DSF/Cu作用后,CNE-2Z细胞体积缩小变圆,膜表面更加光滑,颗粒明显减少。3.氯通道阻断剂使DSF/Cu诱导的CNE-2Z细胞的凋亡率明显减小。4.低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞和永生化鼻咽上皮NP69-SV40T细胞中都表达有Cl C-3氯通道蛋白;相对于NP69-SV40T细胞,Cl C-3氯通道蛋白在CNE-2Z细胞上呈高表达。5.随着DSF/Cu给药时间的增加,Cl C-3氯通道蛋白的表达量也逐渐增加,与DSF/Cu诱导的凋亡在时间上具有相关性。6.全细胞膜片钳的结果显示DSF/Cu激活的CNE-2Z细胞的氯电流密度明显高于NP69-SV40T细胞,且高渗和使用氯通道阻断剂NPPB能够抑制DSF/Cu激活的CNE-2Z细胞氯电流。7.si RNA技术下调CNE-2Z细胞Cl C-3氯通道蛋白的表达后,DSF/Cu诱导的CNE-2Z细胞凋亡率减小,激活的CNE-2Z细胞的氯电流减弱。结论:1)DSF/Cu有选择性诱导鼻咽肿瘤细胞CNE-2Z凋亡的作用。2)Cl C-3氯通道可能参与DSF/Cu诱导CNE-2Z细胞的凋亡过程。3)DSF/Cu选择性诱导鼻咽肿瘤细胞CNE-2Z凋亡的作用可能与Cl C-3氯通道在正常细胞和肿瘤细胞中表达的差异性有关。