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端粒是存在于线状染色体末端的DNA重复序列,它是线状染色体末端的一种特殊结构,由富含GC碱基的DNA简单重复序列及端粒结合蛋白共同构成。端粒具有维持染色体末端结构稳定,防止染色体间末端连接,并且可补偿滞后链5末端在消除RNA引物后所造成的空缺的生物学功能。端粒DNA在染色体上的组成及变化一直都是生物研究的一个重要方面,对13/17罗伯逊易位染色体端粒的研究可以为研究罗伯逊易位的相关遗传机理提供研究资料。
本研究采用HaeⅢ和HinfI内切酶对提取的猪组织基因组DNA样进行双酶切,将酶切产物进行回收连接,根据已知的端粒简单重复序列(TTAGGG)n,通过Primer5.0设计出三条引物,以连接产物为模板进行两次PCR,纯化回收PCR产物,将其连接到pMD18-T载体上,挑取阳性克隆进行测序。将得到的端粒简单重复序列作为探针,采用地高辛随机引物标记法标记探针,对13/17罗伯逊易位猪的染色体标本片进行荧光原位杂交,以检测罗伯逊易位染色体新着丝粒区域是否存在端粒简单重复序列。阳性克隆子的测序结果显示,95~341bp为端粒简单重复序列,因此采用此246bp序列作为荧光原位杂交的探针。荧光原位杂交的检测结果显示,在染色体的两端显示杂交信号,但在13/17罗伯逊易位染色体着丝粒区域不显示杂交信号,说明在13/17罗伯逊易位染色体着丝粒部位发生了端粒序列的缺失。
定位出13/17罗伯逊易位新染色体融合部位发生了端粒序列的缺失,可为进一步研究端粒序列的缺失对13/17罗伯逊易位猪的生产性能产生的影响提供参考,从而为深入研究罗伯逊易位的分子机理提供研究材料。