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糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabeticmelliutus,DM)肾脏微血管并发症,是导致终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)的主要原因之一。DN患者一旦出现持续性尿蛋白则病情不可逆转,因此,积极有效治疗早期糖尿病肾病,控制DN的进展尤为重要。现代医学对DN的病因及发展机理尚未完全阐明,治疗上也无重大突破。而中药在早期DN的治疗上逐渐显示出其优势,导师张庚良教授根据其临床经验,提出了气阴两虚,病程日久肾虚血瘀为早期DN的重要病机,并确立益气养阴活血法为早期DN的治疗原则。目的:本研究通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,观察益气养阴活血方对糖尿病大鼠血糖、肾功能、24小时尿白蛋白排泄率、肾脏病理形态学、肾重/体重的值、肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)含量表达的改变。初步探讨本方防治早期DN的作用机理,为益气养阴活血法防治早期DN提供科学的实验依据。方法:选用健康Wistar大鼠(雄性,体重180±20g)58只,普通饲料喂养1周,按体重随机分为正常组(C,n=10只)、模型组(DM,n=12只)、中药组(DM+Z,n=12只)、厄贝沙坦组(DM+I,n=12只),中药联合西药组(DM+Z+I,n=12只),除正常组外,其他四组均采取腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病模型,造模72小时后测血糖超过16.7mmol/L,即确定为糖尿病模型大鼠。正常组注射相当体积的柠檬酸缓冲液。成模1周后,模型组、厄贝沙坦组、中药组,分别给予生理盐水、厄贝沙坦25mg/kg、益气养阴活血汤灌胃33.5g/kg,每日一次,中药联合西药组,每日上午给同等剂量的中药,下午给同等剂量的厄贝沙坦。正常组也给予相同体积的生理盐水灌胃。实验期间,各组动物自由进食、饮水。于给药后第8周用代谢笼收集24小时尿液,用放射免疫法测定尿微量白蛋白,计算尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAER)。于给药第8周末,禁食8小时,称重,全部动物被处死股动脉取血,分离血清,用全自动生化分析仪检测各组大鼠血糖(PG)、尿素氮(BUN )、血肌酐(Scr)。无菌操作取双肾,剥离被膜后双肾称重,计算肾脏肥大指数(kidney weight/body weight,KW/BW),左肾固定后石蜡包埋,切成4μm厚的切片行HE和PAS染色。光镜下观察肾脏病理形态学变化。右肾组织置4%甲醛初步固定,常规固定,石蜡包埋切片备用,待用免疫组化法检测CTGF在肾组织的表达情况。统计学处理,所有数据均用x±S表示,采用单因素方差分析法,数据统计应用SPSS11.5统计软件完成。结果:(1)一般情况:实验期间,模型组大鼠均出现多饮、多食、多尿及消瘦等代谢紊乱的症状,体毛减少、凌乱,活动减少;并随时间的推移出现糖尿病的各种并发症状,如眼部出现白内障以及肢体尾部等的感染症状等。各治疗组大鼠的整体状况均有改善,其中以联合用药组效果最佳。实验期间模型组大鼠死亡2只,中药组死亡1只,中西医联合用药组死亡2只,死亡原因为灌胃不当,或是高血糖引起的代谢紊乱最终导致脏器衰竭。(2)肾脏肥大指数(肾重/体重):模型组肾重/体重比值明显高于正常组(P<0.01),各治疗组肾重/体重比值明显低于模型组,与模型组比较有显著性差异(P<0.01),联合给药组肾脏肥大指数明显低于中药或西药单给药组(p<0.01),中药与西药两组之间无显著性差异。(3)血糖:造模后糖尿病各组大鼠血糖增高,与正常组比较有显著性差异(P<0.01),中药组,及联合给药组有一定的降糖效果,与模型组比较有显著性差异(P<0.01),单纯厄贝沙坦给药组降糖效果不显著与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。(4)肾功能:模型组BUN、Scr与正常组比较有显著性差异(P<0.01),厄贝沙坦组、中药组及中药联合西药组均能降低BUN、Scr的水平,与模型组比较有显著性差异(P<0.01),联合给药组BUN、Scr明显低于厄贝沙坦或中药单给药组(p<0.05)。(5)24h尿白蛋白排泄率:与正常组相比,模型组24h尿白蛋白排泄率明显升高(P<0.01),厄贝沙坦组、中药组、联合给药组与模型组相比24h尿白蛋白排泄率明显减少(p<0.01);联合给药组24h尿白蛋白排泄率明显低于厄贝沙坦或中药单给药组(p<0.01),厄贝沙坦与中药组比较无显著性差异(P>0.05),说明联合给药组与单一给药组相比对糖尿病肾脏更具保护性。(6)肾组织病理形态学观察:行HE、PAS染色后,光镜下可见:正常组肾小球结构完整,未见肾小球增大,肾小球毛细血管基底膜、系膜、基质未见明显异常改变;模型组光镜下可见肾小球体积增大,肾小球毛细血管基底膜增厚,系膜细胞增生,系膜区增宽;三个治疗组与模型组比较均有不同程度的减轻,尤以联合给药组改善明显。(7)肾组织中CTGF免疫组化结果:免疫组化半定量分析结果显示,模型组CTGF蛋白表达较正常组均显著升高(P<0.01),各药物干预组CTGF蛋白表达较模型组均显著降低(P<0.01);中西药联合给药组CTGF蛋白表达较中药和西药单给药组均明显降低(P<0.05),提示中西联合用药对CTGF蛋白抑制作用更好,厄贝沙坦与益气养阴活血方对糖尿病肾脏的保护作用,可能是通过下调CTGF的表达来实现,但不能完全阻断其表达,而其联合应用具有协同作用。结论:1益气养阴活血法能够改善糖尿病大鼠的一般状态,减少尿蛋白排出,降低BUN、Scr,保护肾脏。2益气养阴活血法对糖尿病大鼠模型的干预作用与厄贝沙坦基本相同,在降糖方面优于厄贝沙坦。3益气养阴活血法方和厄贝沙坦都能抑制CTGF的表达,但中药益气养阴活血法方与西药厄贝沙坦联合使用对CTGF表达的抑制作用更好。提示:中西联合用药对糖尿病大鼠肾脏有更强的保护作用,其机制至少部分与其协同抑制糖尿病肾组织CTGF表达有关,进一步研究可为中西医结合防治糖尿病肾病提供新途径。