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第一部分ZNF471在人食管鳞状细胞癌中作用和机制研究目的:ZNF471(Zinc finger protein 471)位于19q13.43,是一种包含KRAB结构域的锌指蛋白。已有文献报道,ZNF471在胃癌中由于启动子甲基化而表达降低,并且可以作为抑癌基因诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖和转移。但ZNF471在食管鳞状细胞癌发生发展中的具体机制仍未被明确阐述。因此,在本研究中,我们对ZNF471在食管鳞癌中的表观遗传学调控及具体的生物功能和可能的分子机制进行了进一步地探索。方法:采用RT-PCR实验检测ZNF471在人正常组织和食管鳞癌细胞株中的表达情况。通过qPCR实验检测ZNF471在食管鳞癌配对组织(癌和癌旁)中的表达情况。通过MSP实验检测ZNF471在食管鳞癌细胞株和食管鳞癌组织中的甲基化状态。质粒转染人食管鳞癌细胞KYSE150和KYSE410,筛选鉴定ZNF471稳定过表达的细胞株,用于进行细胞克隆形成、CCK-8、流式细胞术(周期和凋亡)、划痕、侵袭、迁移和裸鼠荷瘤实验,探索实验组(ZNF471过表达组)和对照组(空载质粒组)对人食管鳞癌细胞功能的影响。在人食管鳞癌细胞KYSE270中敲减ZNF471,进行CCK-8、流式细胞术(凋亡)、侵袭和迁移实验,进一步验证ZNF471对食管鳞癌细胞功能的影响。通过RNA-sequence测序,联合生物信息学分析、qPCR、western blot、荧光素酶报告和ChIP实验,进一步明确探讨ZNF471在食管鳞癌中发挥抑癌作用的分子机制。结果:我们发现ZNF471在人正常组织及永生化的食管上皮细胞中高表达,但是在人食管鳞癌细胞中不表达或低表达,且ZNF471在人食管鳞癌组织样本中的表达水平显著低于癌旁组织,差异具有统计学意义(p<0.05)。MSP检测发现在KYSE150和KYSE410中ZNF471表达沉默是由启动子甲基化引起的,同时发现62.6%的食管鳞癌组织发生了ZNF471启动子区的甲基化,而24.7%的癌旁组织和0%的正常食管组织中发生了甲基化,充分证实了ZNF471在食管鳞癌组织中的差异性表达是由于其启动子区发生了高频甲基化。同时,在KYSE150和KYSE410中过表达ZNF471可以促进食管鳞癌细胞的凋亡,将细胞周期阻滞在G0/G1期,同时抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。在KYSE270中敲减ZNF471能够促进食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,同时降低细胞凋亡率。我们还发现,ZNF471可能通过激活MAPK10/caspase8信号通路促进食管鳞癌细胞凋亡来发挥抑癌作用。结论:ZNF471由于启动子高甲基化在食管鳞癌细胞和组织中的表达明显降低。ZNF471可以促进食管鳞癌细胞的凋亡,阻滞细胞周期,同时抑制其增殖、迁移和侵袭。ZNF471可能通过激活MAPK10/caspase8信号通路在食管鳞癌中发挥抑癌作用。第二部分IRF4在人食管鳞状细胞癌患者中的预后意义研究目的:IRF4(Interferon Regulated Factor 4)是干扰素调节因子家族的成员之一,位于6q25.3。有研究报道,IRF4在多种血液系统恶性肿瘤中异常表达。本研究主要探索IRF4在食管鳞状细胞癌患者中的预后意义。方法:首先,我们通过免疫组织化学染色实验检测IRF4在食管鳞癌组织及其对应的癌旁组织中的蛋白表达情况。其次,对100例原发性食管鳞癌患者组织中IRF4的表达与其临床病理学指标进行相关性分析。最后,用Kaplan-Meier生存分析法和COX回归分析法评估IRF4的表达与食管鳞癌患者预后的关系。结果:我们通过Kaplan-Meier生存分析法分析发现IRF4表达高的食管鳞癌患者总生存期要明显长于IRF4表达低的食管鳞癌患者,差异有统计学意义(p=0.0006)。通过单因素和多因素分析发现,IRF4蛋白表达是影响食管鳞癌患者OS的独立预后因素。结论:IRF4蛋白表达高的食管鳞癌患者具有更好的预后。因此,IRF4可能可以作为食管鳞癌患者的一个预后的生物标记,或是一个潜在的免疫治疗靶点。