忧遁草微繁技术及部分活性物质的分离鉴定

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:awaydedao132
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忧遁草作为我国一种重要的中草药,在抗炎、抗氧化、抗病毒、抑菌、抗肿瘤等方面具有很好的功效。通过植物组织培养的方式,优化忧遁草培养条件,使其快速繁殖,是忧遁草可持续发展的有效途径之一。本研究的目的是实现忧遁草的微繁并对其部分活性物质进行分离鉴定。主要内容包括:(1)通过改变固体培养条件下的激素配比、培养基类型、蔗糖浓度、NO3-/NH4+、磷源浓度,观察忧遁草组培苗的生长情况并测量茎高及腋芽的诱导率,确定最适合忧遁草组培苗生长的培养条件。(2)利用忧遁草带腋芽的茎段进行丛生芽及根的诱导,探究不同的培养基类型、激素种类及浓度配比对丛生芽和根的诱导的影响,确定最佳的丛生芽和根诱导培养条件。(3)通过改变液体培养条件,实现忧遁草组培苗的微观无土快繁,建立合适的液体培养体系。(4)对忧遁草实生苗与组培苗进行活性物质总黄酮的提取纯化,并进行抑菌性和抗氧化性试验,比较两者之间总黄酮含量及抑菌能力和抗氧化能力的差异性。主要研究结果如下:1.忧遁草生长及腋芽诱导最优培养条件为:改良的MS培养基(40 mmol·L-1KNO3+10 mmol·L-1 NH4NO3+3 mmol·L-1 KH2PO4,其他条件不变)+蔗糖30 g·L-1+琼脂粉6 g·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.8 mg·L-1,pH 6.0,忧遁草生长最快,腋芽诱导率最大。2.忧遁草丛生芽诱导最优培养条件为:MS+蔗糖30 g·L-1+琼脂粉6 g·L-1+6-BA0.8 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+KT 0.2 mg·L-1,pH 6.0,忧遁草丛生芽诱导数最多。3.忧遁草根诱导最优培养条件为:1/2 MS+蔗糖30 g·L-1+琼脂粉6 g·L-1+IBA 1.0mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1,pH 6.0,忧遁草生根数较多,根系发达。4.忧遁草液体微繁最优培养条件为:改良的1/2 MS培养基(20 mmol·L-1 KNO3+5mmol·L-1 NH4NO3+1.5 mmol·L-1 KH2PO4,其他条件不变)+蔗糖20 g·L-1+琼脂粉6g·L-1+IBA 1.0 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.8 mg·L-1+KT 0.2 mg·L-1,pH 6.0。忧遁草叶片葱绿,根系发达,生长旺盛。5.用75%乙醇对忧遁草总黄酮进行粗提,测得忧遁草实生苗总黄酮含量为13.08±0.15 mg·g-1。忧遁草组培苗中的总黄酮的含量是实生苗中总黄酮的含量的1.3倍,为17.22±0.31 mg·g-1。经AB-8型大孔树脂纯化,忧遁草实生苗总黄酮I的含量达到60.56%±0.70%。忧遁草组培苗总黄酮II的含量达到65.62%±0.53%。经抑菌性和抗氧化性试验,总黄酮I和总黄酮II对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用,并对DPPH自由基、羟基自由基都有良好的清除能力。忧遁草组培苗提取的总黄酮II在各方面的性质都要好于忧遁草实生苗提取的总黄酮I。因此,通过组织培养的方式培育忧遁草,不仅对忧遁草的产业化种植提供种苗基础,其在药理方面的研究也有进一步的开发价值。
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