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小睑裂综合症(blephar-ophimosis-ptosis-epicanthus inversus syndrome,BPES)是常染色体显性遗传疾病,临床科室均有发现。其相关基因-Foxl2是一个单一的外显子编码的叉头转录因子,基因突变可导致小睑裂综合征的发生。在女性患者之中,BPES被分为两种类型:Ⅰ型伴有卵巢早衰,而II型卵巢功能及生育力正常[1,2]。Foxl2的转录m RNA先前主要被发现在小鼠胚胎的眼睑、胚胎及性成熟小鼠的卵巢中[1,3]。Foxl2一直表达在卵巢的颗粒细胞上[4]。在青少年群体,卵巢颗粒细胞肿瘤(OGCTs)中,其表达下降[5]。另外,Shah等在2009年发现体细胞Foxl2的突变即402C突变为G[5]。这个突变出现在97%的成人卵巢颗粒细胞肿瘤(OGCTs)中,且对这个肿瘤类型是特异的[6-10]。另发现在结直肠癌中存在Foxl2位点失活,是体细胞超甲基化导致的[11]。更有趣的是,Foxl2的这个突变在任何一种性-索基质细胞肿瘤及不相关的卵巢癌或乳腺癌中未发现[12,13]。另外,Wegman P等[14]在乳腺癌中发现Foxl2基因的表达,并且这可能与芳香化酶的表达及其临床预后相关。BPES相关基因Foxl2的功能越来越多的被发现。小睑裂综合征的相关基因Foxl2被相继被研究,如在眼睑、遗传学、妇产科卵巢功能及少量肿瘤等方面。肿瘤相关的研究仅仅局限于直结肠癌、其他性索间质细胞肿瘤、乳腺癌及卵巢癌之中。据我们所知,Foxl2尚未在宫颈癌中研究过,因此我们分析并探讨了Foxl2在宫颈癌中的表达及对Foxl2对宫颈癌细胞的生物学作用。第一部分小睑裂综合征相关基因Foxl2在宫颈癌中的表达目的检测小睑裂综合征相关基因Foxl2在宫颈癌组织中的表达,并检测Foxl2在宫颈腺癌及鳞癌这两种细胞系中的转录RNA的水平。方法收集的宫颈癌37例患者的癌变组织,分为两组:一组为腺癌,一组为鳞状细胞癌;取宫颈上皮内瘤变(CIN)的8例患者的病变组织,其中包括了低度鳞状内上皮瘤变(LSIL)患者5例,高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)患者10例;取宫颈炎的10例患者的病变组织作为对照组。采用免疫组织化学染色技术,分别检测Foxl2在宫颈癌组织组、宫颈上皮内瘤变组和对照组中的表达;然后,培养人类宫颈癌的腺癌细胞系(Hela细胞)及鳞癌细胞系(Siha细胞),提取RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术分别检测Foxl2基因在这这种癌症的两种细胞系中的表达水平。结果免疫组织化学染色结果显示,Foxl2在宫颈鳞癌组织的切片中表达的阳性率显著高于CIN组和对照组,Foxl2在宫颈鳞癌的组织中蛋白的表达水平相比宫颈腺癌及其他组,呈现为高表达状态。在宫颈腺癌组、CIN组及宫颈炎组中并不表达Foxl2蛋白,也不存在显著差异。RT-PCR结果显示Hela细胞和Siha细胞可转录Foxl2的m RNA。结论在宫颈鳞癌中Foxl2的表达量显著高于相对于宫颈腺癌、宫颈CIN组织及宫颈炎组织;Hela细胞及Siha细胞能转录Foxl2的m RNA。根据Foxl2在宫颈腺癌和鳞状细胞癌,这两种组织中的表达水平的不同,我们将进一步研究Foxl2基因在宫颈癌细胞中的生物学作用。第二部分小睑裂综合征相关基因Foxl2对宫颈癌细胞系的生物学作用目的构建两种细胞系的模型,过表达Foxl2的Hela细胞和沉默Foxl2的Siha细胞模型,研究Foxl2对这两种细胞的增殖、凋亡、粘附及侵袭能力的影响,从而分析Foxl2对宫颈癌的生物学作用。方法利用携带Foxl2的质粒转染Hela细胞,使其过表达Foxl2,同时沉默Foxl2基因在Siha细胞中的表达,利用蛋白免疫印迹法(Western Blotting)验证转染的效率,鉴定过表达及沉默模型;Foxl2过表达或者沉默后,Brdu法检测Hela和Siha的增殖能力;Annexin V/PI法检测Hela和Siha细胞的凋亡率;采用粘附试剂盒检测Hela和Siha细胞的粘附能力;采用侵袭实验分别检测过表达和沉默Foxl2的宫颈癌的两种细胞系的侵袭力;采用流式细胞术(FCM)检测过表达Foxl2的Hela细胞及沉默Foxl2的Siha细胞中Ki67、细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Fas L的表达量,进一步检测和分析调节增殖和凋亡的相关因子的表达。结果Western Blotting结果,与对照组相比,过表达Hela细胞中Foxl2的表达量明显增加;沉默Siha细胞中Foxl2的表达量显著减少(P<0.01),可见转染模型构建成功。Brdu及Annexin V/PI结果表明,与对照组相比,过表达Foxl2后,Hela的增殖能力明显被抑制(P<0.01);沉默组的增殖能力增加,同时其凋亡显著降低(P<0.001)。过表达Hela细胞的粘附无明显改变,但是沉默Foxl2可促进Siha的粘附。侵袭实验提示,过表达组细胞侵袭能力明显减低(P<0.05);沉默组细胞侵袭能力提高(P<0.05)。PCM结果显示,过表达的Hela中Ki67的表达水平明显降低(P<0.001),Fas L的表达增加(P<0.01)。沉默的Siha中Ki67的表达量显著增加(P<0.001),并且Fas L的表达水平降低(P<0.01)。但是,无论过表达还是沉默细胞组中PCNA的表达无明显变化。结论结果表明,小睑裂相关基因Foxl2抑制宫颈癌细胞Hela和Siha的增殖并促进凋亡;抑制Hela和Siha的侵袭能力;与此同时,促进Siha的粘附,但Foxl2对Hela细胞的粘附能力无显著作用。另外,Foxl2下调Ki67在Hela和Siha细胞的表达水平,其同时上调Fas L在Hela和Siha的表达。综上所述,我们的实验研究结果表明,Foxl2在宫颈鳞癌中高表达。一方面,Foxl2抑制宫颈癌细胞的增殖,并抑制其凋亡,这个生物学作用主要是Foxl2通过下调Ki67的表达和上调Fas L的表达水平发挥作用的;另一方面,Foxl2可能是一个新的肿瘤抑制因子,至少在宫颈癌里面。这可能对于评价宫颈癌的转移和复发是有价值的,但是仍需要进一步的研究。