本研究将鸡贫血病毒地方分离SC株和日本中强毒TK5803株，美国弱毒疫苗Delrose株分别接种在MSB1细胞和SPF鸡胚上，比较了鸡贫血病毒不同毒株的培养特性。然后分别提取总DNA，用PCR扩增鸡贫血病毒VP3（凋亡素）基因，测序后比较不同毒株间凋亡素基因的差异。同时构建了凋亡素基因表达载体，为进一步研究鸡贫血病毒的致病机理和凋亡素的功能奠定了基础。 本研究内容包括： 1．鸡贫血病毒三个毒株的培养特性比较：将鸡贫血病毒日本中强毒TK5803株，美国弱毒疫苗Delrose株，地方分离SC株分别接种MSB1细胞和SPF鸡胚。在细胞上的病变情况为：日本中强毒TK5803株从21代到26代都可以产生鸡贫血病毒典型的细胞病变。美国疫苗Delrose株从第6代到第9代，地方分离SC株从第7代到第9代都可以产生典型的细胞病变，但9代以后继续传代，Delrose和SC株都不容易产生典型的细胞病变。鸡胚上的病变产生情况大致相似，TK5803株接种鸡胚1/4死亡，1/4卵黄囊膜出血严重，3/4卵黄吸收不良，肝脏有黄染。Delrose株和SC株接种鸡胚分别有3/3和3/4出现卵黄吸收不良，肝脏有轻微黄染。对照鸡胚发育正常。不同毒株增殖特性的比较为鸡传染性贫血的防治和鸡贫血病毒的深入研究奠定了基础。 2．PCR扩增鸡贫血病毒凋亡素基因及不同毒株凋亡素基因序列的比较：将鸡贫血病毒的细胞培养物用SDS-蛋白酶K法消化，酚：氯仿法提取细胞总DNA后，优化反应条件，扩增出了一条约400bp的条带。分别取三个毒株的细胞培养物和鸡贫血病毒感染组织做重复性实验，都扩增出了该条带。取地方分离SC株和美国疫苗Delrose株的扩增产物直接用于序列测定，结果表明，扩增产物包含了鸡贫血病毒完整的VP3（凋亡素）基因。比较三个毒株的凋亡素基因，我们发现Delrose株与TK5803株（根据已发表序列）的凋亡素基因序列完全相同，与SC株只有一个碱基的差异。另外，通过与Genbank已公布凋亡素基因序列的比较，我们认为，凋亡素基因序列很保守，该基因的序列与毒株的毒力关系不大。这与辛九庆等认为凋亡素的前30个氨基酸的二级结构与鸡贫血病毒毒力的强弱有重要关系不一致。 3．rpTVP3 表达载体的构建：将美国疫苗株的凋亡素基因克隆到克隆载体pUCmT，经酶切鉴定和序列分析，挑选出一株正向插入的重组阳性克隆pUCVP3。用限制性内切酶BamHI酶切下后，将凋亡素基因从pUCVP3 连接到用相同酶处理井去磷酸化的表达载体pTuGET上，根据连接前后，酶切位点的变化，用限制性内切酶HIEdlll筛选出一株正向插入的阳性重组表达质粒rPTVP3。重组质粒rPTVP3具有最新的启动子CMV，它可以在多种细胞上进行瞬时表达和稳定表达的研究。凋亡素基因表达载体的构建，为鸡贫血病毒致病机理的研究和凋亡素的功能研究莫定了基础。