人tensin2 SH2结构域和布氏锥虫ADF/cofilin蛋白的结构与功能

来源 :中国科学技术大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lanrengbuluo
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本论文主要包括人tensin蛋白家族成员tensin2中SH2结构域,布氏锥虫肌动蛋白解聚因子TbCof(ADF/cofilin from Trypanosoma brucei)的溶液结构和功能研究。   1.Src homology2(SH2)结构域是一种保守的蛋白模块,能够参与到多种生化过程中。人tensin蛋白家族是一类主要定位于细胞黏着斑处的蛋白,拥有多个蛋白结构域,能够同时与多种配体结合,在信号传递过程中起着十分重要的作用。有报道称tensin蛋白家族能够通过其分子中的SH2结构域与DLC-1(deleted-in-liver-cancer-1)的结合参与到肿瘤抑制过程。我们利用核磁共振技术(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)解析出tensin2 SH2结构域的溶液空间结构。Tensin2 SH2结构域由位于中心的五条β-折叠片组成的片层结构和围绕于两侧的两段α-螺旋结构构成,具有典型的SH2结构域折叠模式。但与经典的SH2结构域不同,tensin2 SH2结构域不仅能与含有磷酸化酪氨酸的配体(DLC-1)结合,而且能够与不含有磷酸化酪氨酸的配体结合。另外,通过化学微扰实验,我们鉴定出tensin2 SH2结构域中参与配体结合的氨基酸残基,结果表明tensin2SH2结构域与磷酸化和非磷酸化酪氨酸配体的结合采用了相似的结合模式。Tensin蛋白SH2结构域与DLC-1之间的识别对DLC-1的肿瘤抑制功能是必需的,因此,对tensin2 SH2结构域和DLC-1之间相互作用机制的研究为寻找相关肿瘤的抑制方法提供了依据。   2.肌动蛋白(actin)是一种保守的细胞骨架蛋白,广泛存在于真核生细胞中,并参与包括细胞迁移,胞内物质运输,细胞分裂和转录调节在内的多种生物过程。ADF/cofilin(actin-depolymerizing factor,ADF/cofilin)蛋白家族是一种十分重要的肌动蛋白调节因子,能够在空间和时间上对actin进行调节。本论文中,我们鉴定出布氏锥虫中的肌动蛋白解聚因子TbCof(ADF/cofilin fromTrypanosoma brucei)。我们利用核磁共振(NMR)的方法解析出TbCof的溶液结构。TbCof拥有保守的ADF/cofilin家族蛋白折叠模式,由6个β-折叠片组成的β片层结构位于中央,五段α-螺旋结构围绕其四周。等温微量热实验(isothermal titration calorimetry,ITC)表明TbCof与G-actin之间存在较强的亲和能力,并且在实验条件下TbCof与ADP-G-actin的亲和能力约是ATP-G-actin的五倍。电镜及共沉实验结果表明TbCof不能与F-actin共沉淀,但能够使F-actin解聚,并且TbCof的这些特性并不受pH影响。与actin类似,TbCof主要定位于在细胞质中,暗示了两者在细胞内可能存在联系。本实验首次鉴定出布氏锥虫肌动蛋白解聚因子(TbCof),并解析出其溶液结构,证明布氏锥虫中含有一个结构和功能上保守的肌动蛋白解聚因子。对TbCof的鉴定为进一步的研究Trypanosoma brucei中肌动蛋白的动力学调节奠定了基础。
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