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绵羊肺炎支原体（Mycoplasma oumvipneonia， MO）是绵羊养殖过程中的常见病原菌，可以引发绵羊支原体肺炎。该病流行范围广，发病期长，给养羊业造成了巨大的经济损失。本文选择P30外膜蛋白为抗原蛋白，同时以细胞因子IFNγ为疫苗佐剂，将两者串联融合表达。以绵羊肺炎支原体（MO）标准株Y98基因组为模板，设计一对特异性引物，PCR扩增得到795bp的P30目的基因，与文献报道的P30基因序列一致；提取小鼠总RNA，设计特异性引物，通过RT-PCR扩增IFNγ目的基因。将两者定向克隆到原核表达载体pET-22b（+）中，得到pET-P30、pET-IFNγ和pET-P30-IFNγ重组质粒，转化大肠杆菌感受态BL21（DE3）。重组菌株分别命名为BL21（DE3）（pET-P30）、BL21（DE3）（pET-IFNγ）和BL21（DE3）（pET-P30-IFNγ）。由IPTG诱导表达后，经SDS-PAGE及Western blot分析，得到30.0KD、20.1KD和47.2KD的特异条带，与预期的P30外膜蛋白、IFNγ以及P30-IFNγ融合蛋白大小一致，且均具有良好的反应原性。对3种重组菌株进行诱导表达，纯化得到可溶性目的蛋白，制备P30基因工程疫苗、IFNγ佐剂疫苗以及P30-IFNγ融合蛋白疫苗。小鼠免疫保护实验结果显示，P30基因工程疫苗的免疫保护率为60%，IFNγ佐剂疫苗的免疫保护率为20%，P30-IFNγ融合蛋白疫苗的免疫保护率达到80%。间接ELISA实验证实，经100μL与200μL剂量P30-IFNγ融合蛋白疫苗免疫的小鼠血清中，P30抗体效价分别为1:32000与1:64000。经IFNγ佐剂疫苗免疫的小鼠血清中，未检测出阳性P30抗体效价。以上结果证实，所制备的疫苗安全有效，且融合蛋白疫苗中的细胞因子IFNγ组分可以调节机体免疫机能，增强疫苗的免疫保护效果。结合近年来疫苗研制领域的发展动态，本研究还对转基因植物疫苗的研制进行了探究。设计特异性引物，扩增了P30目的基因，将其定向克隆到含黄色荧光蛋白（yellowfluorescent protein， YFP）标签的真核表达载体pCAMBIA1300-YFP中，构建了重组表达质粒pCAMBIA1300-P30-YFP并转化农杆菌（Agrobacterium）感受态细胞，侵染烟草（tobacco）叶片。通过激光共聚焦成像显微镜（cofocal imaging microscope）观察到融合表达的黄色荧光蛋白P30-YFP，Western blot实验得到57KD的特异条带，RT-PCR检测到P30基因在烟草叶片中转录。以上结果证实P30基因在烟草叶片中成功进行了瞬时表达。