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目的:急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)是一种起源于淋巴细胞T系细胞在骨髓内异常增生的恶性肿瘤性疾病,发病机制复杂,医治困难复发率较高,而复发后大多易产生耐药性再次治愈难度极大。本课题探讨细胞周期蛋白WEE1的抑制剂MK1775抗T-ALL的功能和作用机制以及联合谷氨酰胺酶GLS1抑制剂CB839医治T-ALL,有望为后期临床治疗提供新方法。方法:利用oncomine数据库分析T-ALL中WEE1的表达情况,结合免疫印迹实验,以多种T-ALL细胞系为研究对象,验证T-ALL中WEE1蛋白水平的表达情况;采用CCK8检测MK1775对T-ALL细胞系的增值和细胞活性的影响;在细胞水平,利用慢病毒感染技术沉默T-ALL细胞系中的WEE1后,通过Q-PCR检测沉默效率并做细胞计数实验,观察其对细胞生长的影响;通过GSE分析发现c-MYC在WEE1的转录起始有结合,采用UCSC数据分析预测c-MYC在WEE1上保守结合序列,设计Q-PCR引物,利用染色质免疫共沉淀实验检测c-MYC对WEE1的调控机制;采用FACS技术研究MK1775和CB839联合对细胞凋亡的影响。结果:oncomine数据分析结果表明与正常骨髓细胞相比WEE1在T-ALL病人中高表达,同时蛋白质印迹法验证WEE1蛋白水平在T-ALL细胞系中明显高于正常细胞。CCK8实验检测T-ALL细胞系对WEE1抑制剂MK1775的敏感性,大部分T-ALL细胞系的IC50在400nM以下。MK1775对T-ALL细胞有强大的杀伤作用,而对正常细胞毒性很弱。KOPT-K1和CCRF-CEM中沉默WEE1后,细胞的生长明显减缓。UCSC数据分析WEE1基因启动子区域带有转录因子c-MYC的结合位点,CHIP实验验证c-MYC能够结合WEE1的启动子序列,并激活其转录活性。MK1775和CB839在T-ALL细胞系中表现出良好的协同作用。结论:我们在细胞水平研究表明T-ALL中WEE1高表达,同时WEE1的抑制剂MK1775表现出较强的杀伤T-ALL细胞的作用,提示WEE1可能作为靶向治疗T-ALL的一个新的靶点。我们通过数据分析结合染色质免疫共沉淀实验验证:c-MYC直接与靶基因WEE1启动子结合并激活转录。鉴于单靶点靶向医治易产生耐药性,我们通过实验发现WEE1抑制剂与GLS1的抑制剂表现出良好的协同作用,为T-ALL的治疗提供新的思路。