食品安全是一个重大的世界性公共卫生问题,不仅影响到人们的健康,更是关系到国计民生的大事,越来越受到人们的重视,其中细菌性食物中毒是引起食源性疾病的主要因素。传统的细菌检测方法耗时长,操作繁琐,越来越不能满足实际检测的需要。本研究通过设计食源性致病微生物的特异性引物、DNA提取方法的优化、以及退火温度和Mg2+浓度等PCR主要反应条件优化后,建立了沙门氏菌(Salmonella spp.)、单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、志贺氏菌(Shigella spp.)、大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的单重及多重PCR检测体系。扩增结果表明这6株致病菌均有清晰、特异的目标条带,经测序验证其同源性高达99%,DNA灵敏度可达pg级。因此,本研究建立的PCR检测体系特异性强、灵敏度高。同时以国标法为对照,对人为接种致病菌的牛奶样品、生牛肉以及市场采集的200份样品进行了检测。结果表明,采用多重PCR方法简单快速且灵敏度高,整个检测时间在24 h以内,在肉品中的检测灵敏度可达1 CFU/g。与国标法相比,应用多重PCR在200份样品检测中无假阴性,假阳性低于2%。建立的多重PCR方法可作为现有国家标准方法的有效补充,从而提高现有检测方法的准确性和敏感性。此外,本研究在建立了多重PCR方法的基础上,通过固相化技术,构建了多重PCR检测试剂盒,并对其性能进行了分析。集成的固相化试剂盒稳定性和实用性较好,可常温保存3个月以上而不影响检测效果,具有较大的应用价值,可推广应用于食品卫生检测以及临床检验等领域。