本文采用本体聚合法制备红霉素分子印迹聚合物,并应用所制备的红霉素分子印迹聚合物作为人工抗体替代红霉素的生物抗体,建立了一种红霉素分子印迹化学发光免疫检测方法,结果如下:1.红霉素分子印迹聚合物合成以红霉素为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,乙腈为溶剂,偶氮二异丁腈为引发剂,恒温热聚合制备红霉素分子印迹聚合物。2.红霉素分子印迹聚合物制备条件的优化(1)模板分子、功能单体、交联剂的用量:当模板分子、功能单体、交联剂摩尔比为1:4:20时,红霉素分子印迹聚合物吸附性能最佳。(2)聚合溶剂的选择(乙醇,醇,乙腈):当溶剂为乙腈时,红霉素分子印迹聚合物吸附性能最佳。(3)引发剂用量的选择(0.01g、0.05g、0.1g、0.2g、0.3g):当引发剂用量为0.1g时,吸光度值最小,模板分子与功能单体聚合效果最佳。(4)聚合温度的选择(30℃、40℃、50℃、60℃70℃):当在60℃恒温水浴的环境下来进行聚合反应,吸光度值最小,聚合效果最好。(5)聚合反应时间的选择:当聚合反应时间为24h时,聚合反应最充分,合成的红霉素分子印迹聚合物吸附效果最好。(6)聚合物洗脱:配制不同比例的甲醇乙酸混合溶液分别于索式提取器和振荡器中,对红霉素分子印迹聚合物进行洗脱处理,当甲醇与乙酸的体积比为1:1时,在振荡器中洗脱,其洗脱时间最短为24h。3.红霉素分子印迹聚合物性能(1)红霉素分子印迹聚合物吸附性能研究,当红霉素溶液浓度为170?g/m L时,红霉素分子印迹聚合物的吸附量最大,为130.8?g/mg,远远高于非印迹的最大吸附量34.6?g/mg,接近其吸附量的4倍,说明实验制备出来的红霉素分子印迹聚合物对红霉素表现出优越的吸附性能。(2)红霉素分子印迹聚合物吸附动力学由于吸附动力学曲线不随底物起始浓度的改变而改变,并且在红霉素浓度为140?g/m L时有急剧升高的趋势,随着吸附时间的增加,MIP的空穴捕获越来越多的红霉素分子,吸附量迅速增大,4h时基本达到吸附平衡,吸附效果不再受时间的影响。(3)红霉素分子印迹聚合物特异性研究:红霉素分子印迹聚合物对浓度为140?g/m L的红霉素、罗红霉素、氯霉素溶液吸附4h时,红霉素印迹聚合物对红霉素、罗红霉素、和氯霉素的吸附量分别为90.4?g/mg、30.2?g/mg、18.6?g/mg,因此实验制备出的分子印迹聚合物对模板分子的吸附量远远大于对其结构类似物氯霉素和罗红霉素的吸附量,说明MIP对红霉素具有特异性吸附能力。(4)红霉素分子印迹聚合物热稳定性:随着温度的升高红霉素分子印迹聚合物的吸附性能随之下降,但整体来看下降的比较平缓,经温度100℃处理完后,聚合物的吸附量达到了108.4?g/mg,仍是最高吸附量的83%,所以说明实验制备的红霉分子印迹聚合物受温度的影响极小。(5)红霉素分子印迹聚合物耐酸碱腐蚀性红霉素分子印迹聚合物经过酸碱溶液浸泡后其形态基本保持不变,并且能达到最大吸附量的92.9%-96.8%,并且在弱酸和弱碱浸泡下的吸附量要稍高于强酸和强碱浸泡下的吸附量,说明实验制备的MIP受化学性质的影响极小。(6)红霉素分子印迹聚合物重复性红霉素分子印迹聚合物每次的吸附量都会比前一次有所下降,对同一印迹聚合物进行了五次吸附解吸的实验,第五次吸附量为112.3?g/mg,是第一次吸附量的87.46%。由此可见,实验制备的分子印迹聚合物重复性使用良好。4.建立一种应用所制备的红霉素分子印迹聚合物代替生物抗体测定红霉素的直接竞争酶联免法,并与化学发光免疫检测法联用来检测水产品中红霉素的残留量。以红霉素浓度为横坐标,发光值为从坐标,建立了红霉素药残化学发光免疫检测的标准曲线,线性方程为:y=-3154.5x+27563,相关系数为0.988.最低检出限为0.87?g/L,线性范围0.9?g/L-8.1?g/L,其加标回收率在87.7%-92.9%之间,批内变异系数小于8.5%,而批间变异系数则小于13.2%。5.应用所建立的红霉素分子印迹化学发光免疫法与红霉素Elisa分析法进行红霉素检测结果的比较,结果显示,当测量海参均质样品中红霉素添加量为1?g/kg时,红霉素Elisa分析法的检测结果为0.926±0.02?g/kg,红霉素分子印迹化学发光免疫法的检测结果为0?g/kg,当测量海参均质样品中红霉素添加量为3?g/kg时,红霉素Elisa分析法的检测结果为2.786±0.05?g/kg,红霉素分子印迹化学发光免疫法的检测结果为2.568±0.17?g/kg,当测量海参均质样品中红霉素添加量为9?g/kg时,红霉素Elisa分析法的检测结果为8.674±0.04?g/kg,红霉素分子印迹化学发光免疫法的检测结果为7.963±0.13?g/kg,两种检测方法差异极显著。