酶水解淫羊藿提取物制备宝藿苷Ⅰ的研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:renyuh
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宝藿苷Ⅰ(Baohuoside Ⅰ)为小檗科淫羊藿属植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim中的一种多羟基黄酮类单体化合物,也是淫羊藿药材中的一种有效成分,国内外文献报道其抗肺癌细胞活性和生物药剂学性质明显优于淫羊藿中其他黄酮苷类化合物。药理研究表明,宝藿苷Ⅰ具有抗肿瘤、抗骨质疏松等作用,对于骨髓瘤和前列腺癌具有很强的抑制作用。药代动力学研究发现,淫羊藿营在被人体吸收之前,已经在肠道中代谢成了淫羊藿素和宝藿苷Ⅰ,吸收并进入血液循环的主要为能更好被机体吸收的淫羊藿苷的次级苷(宝藿苷Ⅰ)。课题组前期已从淫羊藿药材中分离得到宝藿苷Ⅰ,但其在淫羊藿药材中的含量极低,且与其极性相当的成分很多,故分离纯化较难,步骤繁琐,得率较低。故本课题进一步探究采用简便的方法得到宝藿苷Ⅰ。本论文由三个部分组成,主要以淫羊藿提取物为研究对象,围绕酶水解技术展开,初步探究酶水解技术在中药提取物中应用的适宜性及应用性。第一部分采用体外酶水解技术结合单因素试验、Plackett-Burman实验设计、星点设计-效应面法等方法对淫羊藿提取物进行酶水解反应,得到了相应的工艺路线,并对该工艺进行了优化,最终得到了两个适用于不同含量的淫羊藿苷酶水解反应的工艺,并对其进行了验证实验。所得工艺使得不同纯度淫羊藿提取物中的淫羊藿苷基本完全转化为宝藿昔Ⅰ,研究过程中发现一定含量的提取物中其他一些成分也转化为宝藿苷Ⅰ,在此基础上用淫羊藿提取物(淫羊藿苷含量≥20%)做了验证,证实了在酶水解过程中确实有除淫羊藿苷外的其他成分也转化为宝藿苷Ⅰ。通过一系列的工艺优化,最终得到的酶水解淫羊藿提取物制备宝藿苷Ⅰ的最佳工艺,与现有文献报道的工艺相比,不论从原料的用量方面还是最终产物的转化率方面都有了一定的提高。最后,用其它不同含量的淫羊藿提取物验证了上述最佳工艺的适应性,证明了得到的两个分别适用于低含量和高含量淫羊藿提取物酶水解制备宝藿苷Ⅰ的工艺流程,简便可靠,重复性良好,具有可实施性。第二部分首先建立了淫羊藿提取物酶水解产物中宝藿苷Ⅰ含量测定方法。然后,将酶水解产物用一定方法处理并分离后,采用大孔树脂吸附法、聚酰胺树脂吸附法、重结晶法、萃取法等纯化技术对处理后的反应产物进行分离与纯化方法研究,筛选出最适宜的分离、纯化方法,制得纯度较高的宝藿苷Ⅰ。采用用高效液相色谱法(HPLC法)按上述含量测定方法对最终的产物中宝藿苷Ⅰ进行了含量测定,色谱条件如下,色谱柱:Inertsil ODS-3(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:270 nm。纯化后的酶水解产物中宝藿苷Ⅰ和其他成分分离度良好。该方法简便、准确、重现性好,可用于产物中宝蕾苷Ⅰ的含量测定。第三部分通过研究与分析国内外相关文献,对生物酶水解技术在淫羊藿中的应用研究现状与展望进行了综述。
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