原癌症基因Lmo2不同剪接方式的两种蛋白表达定位的研究

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原癌基因Lmo2(也称Ttg-2或Rbtn-2)是隶属于LIM蛋白家族的一个T淋巴细胞白血病原癌基因,其定位于人类11号染色体11P13区,最初在研究急性T淋巴细胞白血病中的带有特异性t(11;14)(p13;q11)易位时被克隆.为了进一步研究Lmo2不同剪接方式所表达的两种蛋白功能是否存在差异,该论文着重对此两种不同的蛋白产物进行细胞内定位研究,主要进行了以下几个方面的工作:1.利用本实验室先前已构建的5X-Q(151氨基酸)及5X-L(158氨基酸)质粒为模板PCR,得到原癌基因Lmo2两种不同剪接方式的目的片段Lmo2-a/b和Lmo2-c,将其作为插入片断,构建到真核表达载体pEGFP-N1和pcDNA6/Myc-HisB中,新构建的四个质粒分别称为pcDNA6/Myc-HisB-Lmo2-Q,pcDNA6/Myc-HisB-Lmo2-1,pEGFP-N1-Lmo2-Q,pEGFP-N1-Lmo2-L.2.将所构建的pEGFP-N1-Lmo2-Q和pEGFP-N1-Lmo2-L;转染COS7细胞系,进行表达,得到荧光融合蛋白.在荧光显微镜下观察,对此两种不同的蛋白产物进行细胞内定位.由结果初步分析:151氨基酸的LMO2定位于细胞浆内,与158氨基酸的LMO2不同.
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