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第一部分 高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡的研究 目的:探讨不同浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡的影响。 方法:通过胶原酶P消化、Ficol1400纯化得到的成年SD大鼠胰岛细胞,经RPMI-1640培养2天贴壁后,改用含不同浓度葡萄糖的RPMI-1640培养基培养5天,铺成单层。通过放免法测定上清液中胰岛素含量;AO/EB染色观察细胞形态变化;Tunel法计算细胞凋亡率;收集各组细胞,采用TRIzol试剂RNA提取法分别提取各组细胞总RNA,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2及Bax mRNA表达情况。 结果:11.1mmol/L葡萄糖组、22.2mmol/L葡萄糖组培养液中胰岛素分泌量升高(P<0.05),两组之间没有显著性差异(P>0.05)。26.7mmol/L葡萄糖组胰岛素分泌量减少(P<0.05)。11.1mmol/L葡萄糖组、22.2mmol/L葡萄糖组、26.7mmol/L葡萄糖组均可引起胰岛细胞凋亡率增加,26.7mmol/L葡萄糖组还可引起胰岛细胞坏死。11.1mmol/L葡萄糖组、22.2mmol/L葡萄糖组、26.7mmol/L葡萄糖组都可引起胰岛细胞Bcl-2 mRNA表达减少,Bax mRNA表达增加(P<0.05),但三组间无显著性差异(P>0.05)。 结论:(1)、11.1mmol/L葡萄糖组、22.2mmol/L葡萄糖组可促进胰岛细胞凋亡。(2)、26.7mmol/L葡萄糖组可促进胰岛细胞凋亡,还可引起胰岛细胞坏死。(3)、11.1mmol/L葡萄糖组、22.2mmol/L葡萄糖组、26.7mmol/L葡萄糖组胰岛细胞凋亡的机制可能与Bcl-2 mRNA表达减少,Bax mRNA表达增加有关。