2010年4月以来，我国东南部分地区饲养的种鸭和蛋鸭爆发了鸭坦布苏病毒病，以产蛋急剧下降为特点，给养鸭业造成了巨大的损失，因此有必要建立一种快速、敏感、特异的诊断方法。分子生物学技术的发展为黄病毒属病毒的快速诊断带来了新的策略。参照GenBank已登录的黄病毒基因序列设计黄病毒通用引物，建立了基于黄病毒通用引物的高敏感巢式PCR检测方法，为黄病毒、特别是新发黄病毒提供了高效的检测方法。该方法通过序列的比对，选择NS5基因保守区设计了两对通用简并引物Flav P1-Flav P4，在此基础上建立了巢式PCR检测方法，并应用到鸭坦布苏病毒（duck tembusu virus, DTV）的检测中。该方法仅能扩增鸭坦布苏病毒目的基因而不能扩增其他病毒，且敏感性达到90个拷贝·μL-1，比普通PCR高出1000倍。以上结果表明，设计的黄病毒引物具有良好的敏感性和特异性，其巢式PCR敏感性高，并成功的进行了鸭坦布苏病毒的检测。同源性和进化分析表明，新发黄病毒属蚊媒黄病毒类恩塔亚病毒群，与坦布苏病毒及近期报道的鸭坦布苏病毒分离株BYD关系最近。本研究表明该检测方法可以用于该病的临床诊断和流行病学调查，并阐明了鸭坦布苏病毒的进化地位。包膜蛋白（E蛋白）是黄病毒的主要结构蛋白，在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。从规模化养鸭场分离到6株鸭坦布苏病毒，并采用特异性引物成功扩增出E蛋白基因。结果表明，E基因全长1503bp，编码501个氨基酸，序列高度保守。将E基因克隆到pMD18-T载体中，经酶切鉴定和序列测定无误后，再将该基因克隆到表达载体pET21a中，并转化E. coli后进行诱导表达。采用原核表达系统对E基因进行了表达，经SDS-PAGE分析，E蛋白大小54.3kDa，主要以包涵体形式存在。Western blot分析结果表明，表达经亲和层析法纯化后的蛋白能与阳性血清发生特异性反应。亲和层析法从表达产物中纯化目的蛋白，从而为制备鸭坦布苏病毒实验室诊断抗原和分析E蛋白的基因结构与功能的关系奠定了基础。中和试验（NT）和血凝抑制试验（HI）是目前诊断黄病毒感染的最特异方法，然而中和试验耗时较长，费时费力。为建立快速检测鸭坦布苏病毒的血清学方法，以纯化的表达产物作为包被抗原，初步建立了针对E蛋白抗体的间接ELISA检测方法。对ELISA各种反应条件进行了摸索，确定了最适工作条件。优化后确定的抗原最适包被浓度为7μg/mL，血清的最佳稀释度为1∶320，酶标抗体最适稀释度为1∶1000。在优化条件下，阴阳性临界值判定标准为0.3244。本研究快速检测鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA的初步建立为该病的检测和流行病学调查提供了新的方法。