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结核病具有高流行性和高传染性,至今仍是一个严重的公共卫生问题。WHO已将结核病作为重点控制的传染病之一,据估计全球约有1/3的人感染结核菌,每秒有1个新增病例(WHO,2006年)。分枝杆菌在微生物分类中属于放线菌目、分枝杆菌科,临床主要致病的是结核分枝杆菌(MTB),此外还有非结核分枝杆菌(NTM),NTM所引起的结核样病变与结核临床表现相似,但治疗方案和抗药性根据不同种属有所不同。因此对分枝杆菌做出及时准确的分型鉴定、检测对控制结核病疫情具有十分重要的现实意义。分枝菌酸(MA)是一类高分子量的含有α-支链、β-羟基脂肪酸的化合物,是所有分枝杆菌细胞壁脂质的主要组分,其脂肪酸上碳链的长度、不饱和状态、官能团及其含量与生物种型有关,且各生物种型之间MA呈现指纹特征。本论文的目的是通过采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析比较样品中MA之间的差异,建立快速灵敏准确的分枝杆菌种间分型鉴定的HPLC标准方法,并构建分枝杆菌标准菌株的MA指纹谱库,为分枝杆菌的分型鉴定提供了重要的技术方法和谱库数据补充。全文分为四章:第一章前言,简要介绍了分枝杆菌分型鉴别及检测方法的研究现状和存在问题,尤其介绍了HPLC方法的应用。并在此基础上提出了本论文的研究目的和研究内容。第二章建立了以甲醇和二氯甲烷为流动相的梯度洗脱RP-HPLC法。分枝杆菌经过接种、培养、皂化、酸化及衍生化后,采用RP-HPLC进行分析,建立了快速灵敏准确的分枝杆菌种间分型鉴定的RP-HPLC标准方法。第三章采用第二章所建立的方法,构建了49种《伯杰细菌鉴定手册》中所载入的分枝杆菌标准菌株(来源于ATCC(美国标准菌种收藏中心))的MA指纹谱库。通过对各个谱图进行详细分析,依据峰的分布特点可将其分为单簇(14种)、双簇(23种)、三簇及多簇(12种)三类,而后根据相对保留时间和相对峰高比的比例进行种间水平鉴别。此法成功鉴别了41种分枝杆菌(其余8种难以采用此法准确鉴别),对于难以鉴别的部分菌种尝试采用GC法对其进行进一步分型鉴别。第四章在完成第二、三章工作的基础上,使用所建立的方法亦测定了大量来源于DSMZ(德国菌种保藏中心)的分枝杆菌(包含未收录入《伯杰细菌鉴定手册》的菌种)的MA指纹图谱,为分枝杆菌的分型鉴定提供了重要的技术方法和谱库数据补充。