论文部分内容阅读
[目 的]放射性肺炎是接受放射治疗的胸部肿瘤患者常见的早期并发症,可影响患者放射治疗疗效。灯台叶碱作为云南特色的传统中药,具有解痉平喘和消痰止咳的作用,但灯台叶碱对放射性肺炎的研究尚无文献报道。本研究旨在从放射性肺炎相关炎症介质观察灯台叶碱对放射性肺炎的疗效及其机制。[方 法]1.细胞水平研究1)分为放疗组和放疗后灯台叶碱作用组,对比研究炎症相关细胞因子TNF-α、TGF、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10 的变化情况。a)将人肺泡上皮细胞系BEAS-2B接种到96孔板中,不同浓度的灯台叶碱作用于细胞系,通过MTT法检测灯台叶碱对人肺泡上皮细胞系BEAS-2B的毒性作用,分别计算24h、48h和72h的IC50。b)利用流式细胞术微球阵列法(CBA)检测IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和TNF-α的变化情况,2)分别对放疗组和放疗后灯台叶碱作用组应用Real-time PCR及Western blotting实验检测,对比研究两组EMT相关(Vimentin,Snail)mRNA及蛋白表达情况2.动物水平研究1)动物模型的构建采用SD大鼠,根据参考文献及前期实验基础照射剂量选择6Mv X线16Gy。建立放射性肺炎模型;2)放射性肺炎动物模型建模成功后分为阴性对照组、阳性对照组、单纯放疗组、灯台叶碱低剂量组(10mg)、灯台叶碱中低剂量组(20mg)和灯台叶碱高剂量组(40mg),利用流式细胞术微球阵列法(CBA)检测放疗后第10天、第13天、第18天和第21天大鼠血清相关炎症介质TNF的变化情况,利用ELISA检测放疗后第10天、第13天、第18天和第21天大鼠血清相关炎症介质IL-2、IL-4、IL-6、NF-κB。3)通过免疫组织化学(IHC)分别研究各组大鼠肺组织EMT相关分子标记物(E-cadherin,N-cadherin,Vimentin,Snail)的表达情况。[结 果]1.细胞实验1)MTT实验证实:在随着灯台叶碱药物浓度的增加,该药对BEAS-2B细胞株的抑制作用逐渐增强,呈现明显的时间-剂量依赖效应关系。。2)放射治疗后灯台叶碱干预的BEAS-2B细胞上清中,炎症介质IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α水平降低(p<0.05),IL-6在灯台叶碱处理前后未见明显变化。3)实时荧光定量PCR结果显示N-cadherin及E-cadherin mRNA:放射治疗组>灯台叶碱+放疗组;Snail及Vimentin mRNA:放射治疗组<灯台叶碱+放疗组。Western Blotting结果显示两组细胞Vimentin及Snail蛋白的相对表达量:放射治疗组<放疗后灯台叶碱作用组(p<0.05)。2.动物实验1)流式细胞术微球阵列法(CBA)和ELISA结果显示出各灯台叶碱治疗组显著抑制IL-2、NF-κB、TNF-α等促炎因子的升高(p<0.05),但是对血清炎症介质的抑制程度无明显灯台叶碱剂量依赖性。灯台叶碱治疗组可升高血清抗炎因子IL-4的水平(p<0.05),对抗炎因子IL-4血清水平的升高作用无显著的剂量依赖性。2)免疫组织化学结果显示,灯台叶碱能够降低E-cadherin及N-Cadherin蛋白表达(p<0.05),增加 Snail 及 Vimentin 蛋白的表达量(p<0.05)。[结 论]1.灯台叶碱对大鼠放射性肺炎有治疗作用,可缓解放射性肺炎患者肺部炎症,以维持肺部内环境的平衡;2.灯台叶碱可能通过降低血清促炎介质的水平和升高抗炎介质的血清水平以达到治疗放射性肺炎的作用;3.灯台叶碱不通过EMT途径治疗早期放射性肺病(放射性肺炎)。