奥拉西坦（oxiracetam，ORC）是一种环γ-氨基丁酸类促智药，作用谷氨酸盐促代谢受体，防止谷氨酸所致的神经毒性，可促进磷酰胆碱和磷酰乙醇合成，提高大脑对葡萄糖和氧的利用及三磷酸腺苷/二磷酸腺苷的比值，使大脑中核酸和蛋白质的合成增加，研究显示，奥拉西坦能够很好的改善记忆和学习功能。　　 奥拉西坦用于老年性痴呆、多梗死性痴呆及用于神经症、脑外伤、脑炎等引起的脑功能不全、记忆力障碍，为临床广泛应用了的促智药。奥拉西坦的药理作用和安全性已经得到了确认，但其药代动力学研究较少，尚未见奥拉西坦代谢机制及对肝药酶的影响和药物相互作用研究。　　 酮康唑(Ketoconazole)是咪唑类抗真菌药，为肝微粒体酶CYP3A4的抑制剂。本实验以酮康唑作为肝微粒体酶CYP3A4的探针药物，探讨酮康唑对奥拉西坦在大鼠体内药代动力学的影响，从而确定奥拉西坦是否为肝微粒体酶奥酮康的底物，为奥拉西坦临床合理应用提供参考依据。　　 目的:建立奥拉西坦在大鼠体内血药浓度的HPLC测定方法，并对两组分别给予奥拉西坦和酮康唑和奥拉西坦联用的大鼠进行奥拉西坦血药浓度的测定，考察两药合用后药代动力学的特征，从而确定酮康唑对奥拉西坦在大鼠体内药代动力学的影响。　　 方法:　　 1、给药方法及血浆样品采集:健康SD大鼠36只，随机分为对照组（奥拉西坦组）和实验组（酮康唑和奥拉西坦联用），每组18只。对照组每天1次灌胃蒸馏水，实验组每天1次灌胃酮康唑溶液，持续共5d后两组大鼠一次性灌胃奥拉西坦溶液，于给药后不同时间眼内眦取血，-40℃保存。　　 2、血浆样品处理:取冷冻血浆样品室温自然解冻，10000 r·min-1离心5 min，取上清液200μL于带塞离心管中，加入内标溶液（浓度100μL·mL-1）20μL混匀，加乙腈300μL沉淀蛋白，涡旋振荡1 min，10000 r·min-1离心5 min，取上清液400μL于离心管中，40℃水浴下氮气流吹干，残渣用100μL流动相复溶，进样。　　 3、色谱条件:色谱柱:Diamonsil RP C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm);流动相:乙腈-水(3.2∶96.8，V/V);流速:0.8 mL·min-1;检测波长:210nm;柱温:40℃;进样量:20μL;内标:阿昔洛韦。　　 4、标准曲线:配制2，5，10，20，40，60，100μg·mL-1的奥拉西坦模拟血浆样品，按血浆样品处理方法处理后进样。以奥拉西坦与内标的峰面积比值(Y)对血浆药物浓度(X)回归标准曲线方程。　　 5、回收率:分别制备浓度为5，40，80μg·mL-1的奥拉西坦模拟血浆样品各5份，按血浆样品处理方法处理后进样，根据标准曲线方程可以计算出的测得的浓度和理论的浓度的比值，就可以得到方法回收率。　　 6、精密度:制备浓度分别为5，40，80μg·mL-1的奥拉西坦的模拟血浆样品各5份。然后于一日内分别在0，1，2，3，4h处理并进行测定，计算得到日内精密度;于0，1，2，3，4日处理测定，计算得到日间精密度。　　 7、稳定性:对40μg·mL-1的奥拉西坦的模拟血浆样品进行处理后，于0，1，2，3，4h分别测定，考察处理样品的稳定性;对40μg·mL-1的奥拉西坦的模拟血浆样品或即刻进行处理测定或-40℃低温并避光保存5天进行处理并测定，考察低温保存的稳定性;对40μg·mL-1的奥拉西坦的模拟血浆样品即刻进行处理或反复冻融3次进行处理并测定，考察反复冻融稳定性。　　 8、药代动力学分析:大鼠的血浆样品按照血浆样品处理方法进行处理并且测定，根据标准曲线方程来计算出血浆中药物浓度，并用DAS2.1.1药代动力学软件来对大鼠的药-时数据进行处理，计算出各药代动力学参数，并且对两组药代动力学参数进行统计学分析，考察其有无统计学意义。　　 结果:　　 1、奥拉西坦的保留时间为3.7 min，阿昔洛韦的保留时间为7.4 min，血浆内源性物质不干扰奥拉西坦和阿昔洛韦的测定。　　 2、标准曲线方程:Y=0.0217 X+0.1058，相关系数r=0.9992，表明奥拉西坦的血浆药物浓度在2～100μg·mL-1有良好的线性关系。　　 3、回收率:提取低、中、高浓度的奥拉西坦的血浆样品方法回收率依次为（102.3±8.51）％，（96.29±2.76）％和（98.14±1.62）％，RSD值依次为8.32％，2.87％和1.65％。　　 4、精密度:结果表明，低、中、高三种不同浓度的血浆样品的日内精密度的RSD值依次为13.03％，2.87％和1.65％;日间精密度的结果显示，低、中、高三种不同浓度血浆样品RSD值依次为12.60％，5.42％和3.72％。　　 5、稳定性:低温保存5天与反复冻融3次后的血浆样品的性质稳定，其RSD值依次为2.62％和1.03％;处理血浆的样品放置4h后对测定结果不影响，其RSD值为1.09％。　　 6、药代动力学特征:对照组的大鼠和实验组的大鼠按照设计的方案给药后，计算出的药代动力学参数如下:t1/2分别为（2.807±0.880）h和（3.231±1.020）h;Cmax分别为（52.80±16.94）mg·L-1和（47.33±8.317）mg·L-1; Tmax分别为（2.7±0.690）h和（2.4±0.480）h; AUC(0-12h)分别为（257.2±77.84） mg·h·L-1和（258.9±67.30） mg·h·L-1; AUC(0-∞)h分别为（280.8±91.95） mg·h·L-1和（289.2±78.27） mg·h·L-1;CL/F分别为（0.791±0.2700） L·h·Kg-1和（0.473±0.210） L·h·Kg-1;V/F分别为(3.111±1.480) L·Kg-1和（3.338±1.050) L·Kg-1。　　 结论:　　 1、本实验建立了HPLC测定奥拉西坦在大鼠血浆中浓度的方法，该方法能够使内标和奥拉西坦分离良好，血浆中的内源性杂质不干扰测定结果;血浆样品低温保存5天或者反复冻融3次性质依然稳定，处理血浆样品放置4h不干扰测定结果;该测定方法的特点准确、简单、重现性好，非常适用于测定大鼠血浆中的奥拉西坦的含量。　　 2、大鼠在给予安慰剂或酮康唑达到稳态后再给予奥拉西坦，两组的药代动力学参数除MRT0-12h差异具有统计学意义(P＜0.05)外，AUC0-12、AUC0-∞、Tmax、Cmax、t1/2、CL/F和V/F差异没有统计学意义(P＞0.05)，因此，初步认为酮康唑对奥拉西坦在大鼠体内药代动力学无显著性影响，奥拉西坦不是肝微粒体酶CYP3A4的底物。