羟基磷灰石/聚乳酸—羟基乙酸静电纺复合纳米纤维的制备与药物输送应用研究

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静电纺纳米纤维具有纤维尺寸可控、比表面积大、孔隙率高和独特的三维网状结构等特点,可以很好地模拟天然细胞外基质,在组织上程支架材料和药物载体领域具有广泛的应用。聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)具有良好的生物相容性和生物降解性。纳米羟基磷灰石(n-HA)是一种很好的无机药物载体材料,它具有高表面活性和较强的机械性能。本文制备了基于以上两种材料的有机/无机静电纺纳米纤维双载药系统用于药物缓释研究。首先以抗生素类药物阿莫西林(AMX)和抗肿瘤药物盐酸阿霉素(DOX)为模型药,分别负载在n-HA农而,并与PLGA纺丝液均匀混合,通过静电纺丝技术分别制备AMX/n-HA/PLGA和DOX/n-HA/PLGA双载药纳米纤维。然后研究了这种载药体系的机械耐受性、载药和释药性能、药物活性以及生物相容性等特征,并探讨了它们作为药物载体材料或组织工程支架材料的生物医学应用前景。本文第二章通过优化AMX/n-HA的负载百分率,制备了AMX/n-HA/PLGA静电纺复合载药纳米纤维,研究了掺杂的AMX/n-HA对纤维直径、表面孔隙率、亲水性能以及机械性能等的影响,评价了AMX/n-HA/PLGA纤维毡的体外药物释放特性、抑菌活性及生物相容性和血液相容性。结果表明,当n-HA和AMX的浓度分别为1mg/mL和2mg/mL时,负载百分率为20.45%;加入AMX/n-HA对PLGA纤维的形貌及纤维毡的孔隙率、亲水性及内部结构没有明显的影响,而复合纤维直径有明显的降低,机械性能却大大提高;有效地避免了药物初始突释现象,并保持长期的缓慢释放效果。定量和定性分析结果均表明其对金黄色葡萄球菌(S.aureus)有瞬时、长效和梯度抑菌活性;MTT法和细胞形貌表征表明其可以有效促进L929细胞的粘附和增殖,即制备的AMX/n-HA/PLGA复合纳米纤维具有良好的体外生物相容性;溶血试验结果也表明该材料具有很好的血液相容性。因此,该载药纤维毡可以作为功能型组织工程支架的药物缓释载体,在伤口包覆、术后防粘连防感染方面有很好的潜在应用价值。本文第三章通过优化DOX/n-HA的负载百分率,制备了DOX/n-HA/PLGA静电纺纳米载药纤维,并分别对DOX/n-HA和DOX/n-HA/PLGA纳米纤维进行了一系列表征,评价了载药纤维的缓释行为、药物抗肿瘤活性及血液相容性。结果表明,当n-HA和DOX的浓度分别为0.5mg/mL和1mg/mL时,药物负载百分率为43.2%;掺杂DOX/n-HA后,PLGA纳米纤维直径有所降低,机械性能得到提高;复合纳米纤维在PBS (pH=7.4)和醋酸盐(pH=5.4)缓冲液中均具有很好的持续释放效果,同时还表现出在肿瘤滋生的酸性微环境(pH=5.0~6.0)中的相对快速的释放特性;且在实验的药物浓度范围内对人口腔上皮癌细胞(KB细胞)有明显的杀伤力。因此,静电纺DOX/n-HA/PLGA复合纳米纤维抗肿瘤载药体系在肿瘤治疗领域具有巨大的应用潜质。由于多孔静电纺纳米纤维对染料的极强吸附作用,使得常规的MTT细胞毒性实验有可能产生假阴性结果。因此有必要探索一种可靠的评估静电纺纳米纤维的细胞生物相容性的技术。本文第四章系统地研究了应用刃天青还原实验(REMA)评价材料生物相容性的可能性。结果表明,未还原的刃天青在0.1mg/mL时具有最高荧光强度。还原产物荧光强度在细胞浓度为0~50×104个/mL时表现出很好的线性关系,随后依次递减;在共培养时间0~10小时内表现出二次增长曲线关系。同时纳米纤维毡对刃天青还原产物没有明显吸附现象;该实验结果表明,和MTT法相比,REMA法可以更加准确地用于培养在静电纺复合纳米纤维上的细胞活力的测试。
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