论文部分内容阅读
沙蒿多糖(Artemisia sphaerocephala polysaccharide,ASP)是从沙蒿籽榨油后剩余的废渣中提取的多糖类物质,其主要成分为半乳甘露聚糖,是高度分支的线形大分子,具有良好的降血糖作用和一定的抗氧化活性。沙蒿多糖硫酸化衍生物(Sulfated derivatives of ASP,SASP)、磷酸化衍生物(Phosphated derivatives of ASP,PASP)和硒酸化衍生物(Selenide of ASP,SeASP)分别是以ASP为原料,通过化学反应法对其结构进行硫酸化、磷酸化和硒酸化修饰而制得,前人研究发现其体外抗氧化活性得到一定的提高。因此,本实验采用肝癌HepG2细胞研究ASP、SASP、PASP、SeASP的体外降血糖活性差异:通过观察ASP、SASP、PASP、SeASP对HepG2细胞生长曲线的影响,探讨ASP、SASP、PASP、SeASP对细胞生长期的作用特点;并通过体外葡萄糖消耗实验和四甲基偶氮哇蓝(MTT)毒性实验来初步探索ASP、SASP、PASP、SeASP对HePG2细胞的降血糖作用和毒性效应;优化胰岛素的诱导条件,建立稳定的HepG2细胞胰岛素抵抗模型,检测ASP、SASP、PASP、SeASP对胰岛素抵抗的HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,分别探讨ASP、SASP、PASP、SeASP处理的HepG2细胞对胰岛素的增敏效果和降血糖作用。研究结果表明:1. ASP、SASP、PASP和SeASP在低浓度(0.02mg/ml和0.05mg/ml)时促进HepG2细胞生长,药物作用的1-3天为对数生长期。在试验浓度0.02～1mg/ml范围内,ASP、SASP、PASP和SeASP均可不同程度降低HepG2细胞的存活率,存活率与剂量成反比,其中1mg/ml SASP毒性最大,细胞存活率为86.749%,而其小浓度时细胞存活率最高,为99.863%。2. ASP、SASP、PASP和SeASP可不同程度增加HepG2细胞的葡萄糖消耗,以0.1mg/ml时降糖效果最好,葡萄糖摄取率依次为146.942%,154.393%,145.521%,116.968%。扣除对细胞存活率的影响,SASP的降糖效果最好(p<0.01),其次为ASP和PASP(P<0.05),说明ASP、SASP和PASP对于抗糖尿病的药物研究具有一定意义。3.综合对细胞存活率的影响,10-7mol/L胰岛素作用36h可建立最佳的HepG2细胞胰岛素抵抗模型,该模型特征在48h内稳定。4. 0.1mg/ml ASP、SASP、PASP、SeASP均可不同程度增加HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量,作用强弱顺序为SASP>ASP> PASP >SeASP,这可能与它们的结构差异有关,SASP作用36h和48h的效果最明显(p<0.01),可作为胰岛素增敏剂药物进一步研究降血糖作用。