【摘 要】
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背景与目的:细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)为有丝分裂期(M期)细胞周期蛋白,与细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK1)结合形成成熟促进因子(muturior promoting
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背景与目的:细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)为有丝分裂期(M期)细胞周期蛋白,与细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK1)结合形成成熟促进因子(muturior promoting factor,MPF),MPF的激活为真核细胞启动有丝分裂所必需,在肿瘤的发生发展中起重要作用;Cyclin B1在许多肿瘤细胞系均高表达,其高表达被视为肿瘤具有恶性潜能的标志之一。反义cDNA是反义技术中一种简便有效的下调靶基因的方法,但目前尚未见应用该方法靶向Cyclin B1基因抗肿瘤治疗的相关报道。 方法:构建含有小鼠Cyclin B1反义全长cDNA的重组质粒(pAS-mCLB1)并将pAS-mCLB1及空载体pcDNA3.1(+)分别转染小鼠Lewis肺癌(LL/2)和CT26结肠癌细胞系(CT26),建立了AS-mCLB1及pcDNA3.1(+)稳定转染子(Ac及Pc细胞);通过流式细胞仪检测Ac、Pc及未经转染(Nc)细胞的细胞周期分布及凋亡;分别用两步法半定量RT-PCR及Western blot比较上述三种细胞中mCyclin B1的mRNA及蛋白含量;MTT及细胞生长实验用于检测细胞增殖活性;在小鼠体内分别接种上述三种细胞,观察细胞在体內的成瘤性及荷瘤小鼠的生存时间;然后对Ac与Nc组的细胞及动物血清进行蛋白组学差异分析;免疫组化检测
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