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qPCR是核酸定量检测的重要方法之一,同时也是转基因水稻外源基因拷贝数测定的主要方法。其中标准品的正确选择以及构建合格的标准曲线是qPCR定量精确性的保证之一。本研究旨在通过qPCR技术测定Bar基因拷贝数以探讨转基因水稻中Bar基因拷贝数与适合度性状的关系。本研究通过选取含有内参基因基因Sps和目的基因Bar的转基因水稻基因组DNA、未线性化pBS质粒DNA和线性化质粒DNA为标准品,将标准品稀释为106、105、104、103、102 5个浓度,三种标准物质和两个基因构建6条标准曲线进行比较分析。6 条标准曲线方程分别为 y =-3.6937x +42.727、y =-3.6752x +39.912、y =-3.1857x +37.493、y =-3.2397x +34.952、y =-3.3639x +36.296、y =-3.3143x +33.331;线性化pBS质粒DNA构建的两条标准曲线扩增效率分别为98.28%和100.32%,接近100%;三者在5个浓度点的目的基因Bar与内参基因Sps的Ct值差,即△Ct=(CtBa如基因-CtSps基因)均值分别为2.74、2.76和2.77,基本一致。本研究表明质粒标准品DNA标准品和基因组DNA标准品在构建标准曲线时,得到的标准曲线方程斜率和纵截距均有显著差异。因此在标准品选取时,虽然两者均可以用于相对定量,但是线性化质粒DNA标准品相比未线性化质粒DNA标准品和基因组DNA标准品更适合构建标准曲线。以含有不同Bar基因拷贝数的转基因水稻MH63(cry1C*/Bar)为材料,利用qPCR鉴定16株亲代单株及其16个子一代群体152个单株的Bar基因拷贝数,16个子一代种群成熟期分别测定株高、分蘖数、穗数、穗长、单株总粒数、单株饱粒数、千粒重、结实率和单株总粒重9个性状。研究发现,16个亲代单株Bar基因拷贝数在0.51到7.54之间,子一代Bar基因拷贝数在0到4之间,16个子一代群体内Bar基因拷贝数均发生不同程度变化。子一代中株高、分蘖数、穗数、穗长、单株总粒数、单株饱粒数、千粒重、结实率和单株总粒重9个性状与非转基因受体水稻MH63比较,随Bar基因拷贝数的升高有不同程度的降低,最高分别降低-8.16%、-6.57%、-9.90%、-19.85%、-14.22%、-11.27%、-6.90%、-28.41%和-30.95%。转基因水稻 MH63(cry1C*/Bar 在常规种植条件下,其田间的株高、穗长、千粒重、结实率、单株饱粒数和单株总粒重等性状与Bar基因拷贝数呈显著的负相关关系,P值分别为0.000、0.000、0.000、0.000、0.019 和 0.024。