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金佛山兰（Tangtsinia nanchuanica S.C.Chen）是兰科金佛山兰属（Tangtsinia）草本植物,株高15-35 cm,一般生长在700-2100 m的林下光照处、灌木丛边缘或草坡上。于上个世纪60年代在我国重庆市南川金佛山被植物学家陈心启先生发现并定名,是我国兰科特有的一种单属单种植物。其分布范围狭小、数量稀少,被纳入《中国植物红皮书》,是国家二级保护植物。金佛山兰有着比兰亚科（Subfam.Orchidoideae）中最原始的头蕊兰属（Cephalanthera）更原始的特征,对研究兰亚科系统发育、植物系统演变均有非常重要的意义。同时,金佛山兰属于较为古老的孑遗植物中的一种,对植物遗传变异、区系地理、遗传多样性、全球生态多样性等的研究也具有重要价值。此外,自古以来我国兰科植物就因其风格独特、姿态优美而备受赞誉,有着极高的观赏价值、文化价值和经济价值,还可食用、药用。我国兰科植物栽培历史悠久,主要通过分株繁殖、假鳞茎繁殖、种子繁殖和组织培养繁殖。但是,金佛山兰种群和个体数量稀少、种子结实率低、人工栽培存活率低,因此组织培养是其较理想的繁殖方法。迄今为止,关于金佛山兰的组培快繁研究鲜有报道。本试验以金佛山兰开花植株为材料,采用植物组织培养技术,以子房等器官为外植体,通过起始培养、丛芽诱导、丛芽继代和生根建立了金佛山兰的离体快繁体系,通过复壮、再造和新建人工种群初步实现了金佛山兰的野外回归。主要研究结果如下:1.金佛山兰的起始培养以金佛山兰（Tangtsinia nanchuanica S.C.Chen）开花植株为试验材料,以叶片、柱头和子房等为外植体,进行了表面消毒方法的确定和起始培养,成功获得了金佛山兰的无菌外植体。试验结果表明,经75%乙醇漂洗30 s后,在无菌条件下用0.1%的氯化汞溶液消毒4-6 min,无菌水冲洗5-6次最佳。将植株消毒后切割、分离并用滤纸吸水沥干,然后分别接种到MS+2.0 mg·L-11 ZT+0.2 mg·L-11 NAA启动培养基中培养,大部分存活率高于85%,污染率在23%以下,可获得较多的无菌外植体。2.金佛山兰的丛芽诱导以金佛山兰（Tangtsinia nanchuanica S.C.Chen）无菌外植体为试验材料,研究了不同外植体（叶片、茎段、根段、根状茎、花瓣、柱头、子房等）、不同培养基(MS+0.2 mg·L-1NAA+2.0 mg·L-16-BA、MS+2.0 mg·L-1ZT+0.2 mg·L-1NAA、MS+0.2 mg·L-11 6-BA+2.0 mg·L-11 NAA、MS+0.2 mg·L-11 6-BA+2.0 mg·L-11 2,4-D)以及基本培养基（MS、B5、N6）、植物生长调节剂ZT(0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0mg·L-1)和NAA(0.05、0.10、0.15、0.20 mg·L-1)对丛芽诱导的影响。初期试验结果表明,金佛山兰丛芽诱导的最佳外植体为子房,最佳丛芽诱导培养基为ZT 2.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1,丛芽诱导率达33.33%,增殖系数为2.33,继代丛芽1-3代平均繁殖系数为2.44。后期试验结果表明,丛芽诱导最佳基本培养基为MS;最佳丛芽诱导培养基为MS+4.0mg·L-11 ZT+0.2 mg·L-11 NAA,增殖系数达7.05,丛芽生长良好。3.金佛山兰丛芽的继代培养以金佛山兰（Tangtsinia nanchuanica S.C.Chen）丛芽的单个不定芽为外植体,研究了植物生长调节剂ZT(0.5、1.0、1.5、2.0 mg·L-1)与NAA(0.05、0.1、0.15、0.20 mg·L-1)不同浓度配比、不同细胞分裂素（ZT、KT、TDZ、6-BA）对金佛山兰丛芽继代的影响。试验结果表明,金佛山兰丛芽继代的最佳培养基为MS+4.0 mg·L-11 ZT+0.2mg·L-1NAA,1-4代平均繁殖系数为5.94;最佳细胞分裂素为TDZ,增殖系数达11.32,丛芽生长良好。4.金佛山兰不定芽的生根以金佛山兰（Tangtsinia nanchuanica S.C.Chen）继代丛芽的单个不定芽为外植体,研究了培养基矿质含量（MS、1/2 MS、1/4 MS）,植物生长调节剂NAA(0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mg·L-1)、6-BA(0、0.05、0.1、0.5 mg·L-1)、IBA(0、0.5、1.0 mg·L-1)、蔗糖浓度(10、20、30、40、50 g·L-1)、活性炭浓度(0、1、2 g·L-1)、凝固剂种类（琼脂和植物凝胶）和生根方法（两段生根和一般生根）对金佛山兰不定芽生根的影响。试验结果表明,金佛山兰不定芽生根的适宜基本培养基为1/2 MS;最佳生根培养基为1/2 MS+0.5 mg·L-1NAA+0.05 mg·L-16-BA,不定根平均长度达3.95 cm,平均数量为16.65条;生根培养基最佳蔗糖浓度为40 g·L-1;生根培养基最佳活性炭浓度为2 g·L-1;生根培养基凝固剂以植物凝胶较佳;一般生根法生根效果较好。5.金佛山兰试管苗的移栽以金佛山兰（Tangtsinia nanchuanica S.C.Chen）试管苗为材料,研究了时间（封瓶炼苗5、10、15 d、开瓶炼苗1、3、5 d）、移栽基质（骨石子;草炭土;骨石子:品氏营养土=1:1;骨石子:草炭土=1:1;骨石子:胡氏营养土=1:1;品氏营养土:草苔藓=1:1;草炭土:珍珠岩=1:1;品氏营养土:珍珠岩=1:1）、杀菌剂（75%百菌清、多菌灵、70%甲托、80%代森锰锌、40%菌核净、50%异菌脲、45%甲霉·噁霉灵）对金佛山兰试管苗生长和移栽成活率的影响,并在此基础上进行了野外回归试验。试验结果表明,金佛山兰试管苗的最佳炼苗时间为封瓶炼苗10 d,开瓶炼苗1d,存活率为100%;最佳移栽基质为骨石子:草炭土=1:1,幼苗存活率为100%;杀菌剂杀菌效果最佳的为多菌灵,幼苗存活率为70.83%。将炼苗后的试管苗（36株）移栽到校内实验地中,60 d后全部死亡。以炼苗后的试管苗（138株）移栽到南川金佛山,野外新建种群1个、复壮种群2个、再造种群1个。野外回归60 d后,新建种群的存活率为84.91%,2个复壮种群的存活率分别为72.73%和71.43%,再造种群存活率为33.33%。幼苗生长正常。