人源脂联素及其受体的表达纯化和两者间相互作用的研究

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脂肪细胞分泌表达的脂联素能够识别、结合肝脏或骨骼肌中的脂联素受体,通过下游AMPK、PPARα等途径刺激葡糖糖摄取和脂肪酸氧化,维持体内能量稳态,发挥胰岛素增敏作用。脂联素及其受体代谢或功能异常导致机体多种疾病的发生,如胰岛素耐受、肥胖、动脉粥样硬化等等,恢复其含量或功能能够有效缓解各类疾病。因此,脂联素及其受体成为治疗胰岛素耐受等疾病的全新重要靶点。在体内,脂联素球形结构域部分能够结合肝中Adip R1,形成配体-受体复合物,但两者间相互作用机制尚不清楚。本文构建了脂联素(104-244)原核及昆虫细胞表达系统,鉴定及筛选了表达纯化克隆,通过亲和纯化得到带有GST或MBP融合蛋白的脂联素蛋白及经PPase和TEV水解去除融合蛋白后单独的脂联素蛋白,并对蛋白蛋白行为进行分子筛分析。结果显示,试验纯化的到的脂联素蛋白在自然条件下能形成二聚体。构建了脂联素受体1三种截短体(22-375、72-37、89-375)蛋白昆虫细胞表达系统,优化蛋白表达及纯化条件,纯化得到三种截短体蛋白。结果显示,部分脂联素受体1蛋白能够通过二硫键形成二聚体。在得到蛋白的基础上,通过分子筛层析及GST-Pull down、Ni-Pull down进行了两种蛋白相互作用的研究,结果表明,原核及昆虫表达系统得到的脂联素蛋白与昆虫表达系统得到的脂联素受体1蛋白无明显的相互作用。
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