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主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHCⅠ)能够递呈病毒抗原,从而激活细胞毒性T细胞(CTL),活化的CTL可以识别并清除病毒感染的细胞。已有的研究表明,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)能够下调单核/巨噬细胞表面的猪白细胞抗原Ⅰ类分子(SLA Ⅰ)。本论文分析了PRRSV下调猪肺泡巨噬细胞(PAMs) SLA Ⅰ类分子的机制,以期为理解PRRSV的免疫抑制和免疫逃逸机理提供科学依据。流式细胞术分析结果表明,高、低致病性PRRSV毒株的感染均可下调PAMs表面SLA Ⅰ类分子水平,且高致病性PRRSV毒株的能力更强。进一步以高致病性PRRSV毒株JXwn06为材料,分析了PRRSV感染细胞表面SLA Ⅰ类分子的内化动态和细胞内SLA Ⅰ类分子的外排趋势。结果显示,PRRSV感染可导致胞内SLA Ⅰ类分子外排水平减少,但SLA Ⅰ类分子的内化过程不受影响。分别用针对SLA Ⅰ-HC和β2m的特异性多克隆抗体进行Western blot分析,结果显示,高、低致病性PRRSV毒株感染PAMs的HC和β2m的蛋白水平均明显下调,且高致病性PRRSV毒株的下调效应更显著,而加入蛋白酶体抑制剂后,HC和β2m蛋白的下调程度随之减弱。同时,HC和β2m蛋白发生明显的泛素化。以上结果表明,PRRSV感染能够诱导HC和β2m经蛋白酶体途径降解,从而导致PAMs表面SLA Ⅰ类分子水平的下调。利用慢病毒系统包装PRRSV各结构蛋白和非结构蛋白,并转导PAM传代细胞系3D4/21,进行流式细胞术分析。结果显示,表达病毒非结构蛋白la (Nsp1α)的慢病毒转导细胞表面的SLA Ⅰ类分子水平明显下调。同时,转导PK-15和IPEC-J2细胞的表面SLA Ⅰ类分子水平也下调,并伴随着HC和β2m蛋白含量的明显下降。分别构建HC和β2m及Nsp1α和2个Nsp1α突变质粒,通过突变分别破坏Nsp1αN端锌指结构域构象(M-NZF)及其木瓜样蛋白酶活性(M-PCPα)。将构建的质粒分别共转染HEK 293T细胞,结果显示,Nsp1α及其突变蛋白均能够与HC和β2m蛋白发生互作,且Nsp1α能够诱导HC和β2m经泛素-蛋白酶体途径降解,但其N端锌指结构域的构象变化可影响Nsp1α的诱导活性。此外,激光共聚焦分析结果表明,Nsp1α能够与HC以及β2m主要共定位于细胞质中。不同截短后的Nsp1α均不能诱导HC和β2m蛋白的降解。以上结果表明,Nsp1α N端锌指结构域的构象对于其完整分子诱导的HC和β2m的泛素-蛋白酶体降解十分重要。综上所述,我们的研究表明,PRRSV可通过诱导PAMs HC和β2m经泛素-蛋白酶体途径降解从而减少SLA Ⅰ类分子的外排,最终导致细胞表面SLA Ⅰ类分子水平的下调；PRRSV Nsp1α具有诱导HC和β2m经泛素-蛋白酶体途径降解的能力。研究结果揭示了PRRSV感染影响PAMs递呈抗原能力的分子机制,为进一步阐释PRRSV的免疫抑制和免疫逃逸机理提供了有价值的科学依据。