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帕金森病(PD)是一种常见的中枢神经系统慢性退行性疾病,其主要病理改变为中脑黑质多巴胺(DA)神经元的变性、丢失。临床主要表现为静止性震颤、肌肉僵直、运动迟缓、体态不稳等一系列运动障碍症状。目前已发现线粒体的功能障碍是导致PD多巴胺神经元变性丢失的主要原因之一。越来越多的研究显示,线粒体呼吸链酶复合物I结构和功能的异常与线粒体功能障碍密切相关。但由于PD病因病机的复杂性,目前尚无理想的治疗方法,西药虽能控制症状,但长期服用疗效降低,且毒副作用较大。传统中医方药治疗PD有一定的疗效,日益引起人们的重视。根据中医对PD(颤证)病因病机的认识,祛风化痰止痉和滋阴降火潜阳是治疗的重要法则,牵正散和大补阴丸则是临床常用经方。本研究以MPTP诱导的PD小鼠模型为研究对象,从线粒体复合物活性以及线粒体基因调控方面探讨牵正散和大补阴丸对多巴胺神经元的保护作用,揭示中药治疗PD的机制和作用环节,为中医药临床治疗PD提供线索和实验依据。本实验分为两部分：(1)通过观察牵正散和大补阴丸对PD小鼠行为学、中脑黑质病理学、多巴胺能神经元形态数目、脑DA及其代谢产物含量的影响,研究其对PD小鼠多巴胺能神经元的保护作用。(2)观察牵正散和大补阴丸对PD小鼠脑线粒体酶复合物的活性变化、线粒体基因的损伤情况；并运用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹技术,观察中药对PD小鼠脑线粒体酶复合物1相关线粒体基因和蛋白表达的影响,探究中药保护多巴胺神经元的作用机制和环节。实验选用C57BL/6J小鼠,腹腔注射生理盐水配制的0.3%MPTP溶液(20mg或30mg/kg/d),连续5d,建立PD动物模型。动物随机分为5组：正常对照组(简称正常组)、模型对照组(简称模型组)、牵正散治疗组(简称牵正组)、大补阴丸治疗组(简称大补组)、牵正散合大补阴丸治疗组(简称合方组)。动物存活期为56d。主要实验结果如下：1.牵正散、大补阴丸及其合方对PD模型小鼠行为学的影响腹腔注射MPTP造模后,小鼠出现了不同程度的体态异常、活动障碍。与正常组相比,模型组小鼠56天平均爬杆时间无明显差异；与模型组相比,三个治疗组爬杆时间也没有统计学差异。2.牵正散、大补阴丸及其合方对PD模型小鼠黑质病理学的影响模型组黑质神经元数目与正常组相比明显减少,并可见形态萎缩,浓染的神经元。与模型组比较,三个中药治疗组的黑质神经元有所增多,残存的形态萎缩的神经元数目减少。3.牵正散、大补阴丸及其合方对PD模型小鼠黑质多巴胺神经元的影响造模后,PD小鼠酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目比正常组显著减少(p<0.01)；与模型组比较,3个中药治疗组TH阳性表达增强,阳性神经元数目也增多(p<0.05)。4.牵正散、大补阴丸及其合方对PD模型小鼠黑质神经元超微结构的影响模型组小鼠黑质内有的神经元可见胞体缩小,细胞核膜凹凸不整、变形扭曲,胞质内线粒体结构模糊,可见线粒体嵴紊乱或缺失等变化；与模型组相比,大补阴丸、牵正散和合方组神经元核膜折叠凹陷减少,线粒体嵴的断裂和缺失减少。5.牵正散、大补阴丸及其合方对PD模型小鼠脑多巴胺及其代谢产物含量的影响与正常组比较,造模后各组小鼠的前脑DA及其代谢产物高香草酸(HVA)、二羟基苯乙酸(DOPAC)含量明显降低(p<0.05)；与模型组比较,合方组前脑DA的含量明显增加(p<0.05)；而HVA和DOPAC的含量三个治疗组和模型组都没有明显差异；中药治疗组之间比较,合方组的前脑DA的含量比大补组明显增加(p<0.05)。6.牵正散、大补阴丸及其合方对PD模型小鼠脑线粒体酶复合物活性的影响与正常组比较,模型组小鼠脑线粒体酶复合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性均有显著降低(P<0.05),而复合物Ⅰ活性从数值上看有较明显的降低,但无统计学上差异；与模型组比较,合方给药能明显改善小鼠脑复合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性(P<0.05),大补阴丸则能改善小鼠脑线粒体酶复合物Ⅱ、Ⅳ的活性(P<0.05),牵正散未能明显改善复合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性。7.牵正散、大补阴丸及其合方对PD模型小鼠脑mtDNA损伤的影响与正常组相比,模型组小鼠脑mtDNA的损伤系数明显增加(p<0.01)；而与模型组比较,中药治疗组中的大补组和合方组小鼠的脑mtDNA损伤程度明显减轻(p<0.05)。牵正散小鼠脑mtDNA损伤系数与模型组相比,在数值上看有降低,但差别无统计学意义。8.牵正散、大补阴丸及其合方对PD模型小鼠脑线粒体ND1、ND4、ND6mRNA的影响与正常组比较,模型组小鼠脑线粒体ND1mRNA、ND4mRNA的表达显著降低(p<0.05),ND6mRNA的表达无明显变化。与模型组比较,大补和合方组可提高ND1mRNA的表达,三个治疗组均可提高ND4mRNA的表达(p<0.05)；而三个治疗组ND6mRNA的表达与模型组相比无明显差异。9.牵正散、大补阴丸及其合方对PD模型小鼠脑ND1、ND4、ND6蛋白亚基的影响Western blot实验结果显示：ND1抗体检测到分子量约为36kDa的条带。模型组的ND1表达相对正常组统计学上并没有显著差异,但从数值上看都有降低。三个治疗组小鼠脑线粒体ND1表达相对模型组也没有明显改变。由于ND4,ND6亚基本身含量少以及实验过程中抗体的质量问题,在反复多次实验中,检测到的目的条带组数未达到统计数。结论：①中药牵正散、大补阴丸及其合方可以不同程度减少PD小鼠多巴胺神经元的损伤和丢失,起到神经保护作用,其中合方的作用要优于单方。②中药可通过提高PD小鼠脑线粒体复合物活性、减轻线粒体基因的损失及调节线粒体相关基因的表达来改善脑线粒体的功能,从而达到多巴胺神经元的保护作用。③中药不能明显影响脑线粒体基因编码的复合物I蛋白亚基的表达。