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产羔数性状是山羊生产中的最重要经济性状之一,很大程度地决定了整个山羊生产行业的经济利益。产羔数性状遗传力低(约0.152),常规的选择育种效应有限,进展慢。随着现代分子生物学理论及基因组学的发展,特别是越来越多的多胎性分子标记在一些家畜品种中被发现,分子标记辅助选择策略及技术为提高繁殖性状的选择效果,加快遗传进展提供了新的机遇。
鉴于卵泡抑制素在母羊繁殖轴、卵巢中的重要作用,INHA、INHBB及INHBA基因被作为强的山羊多胎性候选基因,考虑到INHBB及INHBA卷入了激活素基因构成中,以及INHA基因的免疫效果,INHA基因被作为重点研究。四个山羊品种作为研究品种。初步采集具产羔记录的209头波尔山羊、53头马头山羊、55头海门山羊及63头努比山羊作为实验材料。采用PCR-SSCP、PCR-RFLP等方法,研究了上述3个候选基因的多态性。采用一个固定模型统计每一个分型位点各基因型的产羔数最小二乘均值,然后检验各基因型效应间差异显著性。
此外,作为性状关联分析的辅助分析,多态的一些群体遗传学特征被分析,包括基因型分布的群体关联检验、多态位点间的连锁不平衡及可能的单倍型估计。主要结果如下:
1、在波尔山羊群体INHA基因存在12个遗传多态,为-522C>G、-506->G、-446C>T、-155C>T、-65G>C、129G>A、567G>A、651A>G、792T>C、906C>T、911T>C、946A>C;海们山羊群体中存在除.522C>G外的其它11个;马头山羊中选择性鉴定了-446C>T、-65G>C、567G>A、651A>G、911T>C、946A>C;努比山羊中选择性鉴定了-446C>T、-65G>C、567G>A、911T>C、946A>C;所有12个多态可能为这4个山羊品种间的共同多态。其中,911T>C和946A>C分别引起该处氨基酸编码的改变,即299 Val>Ala和311Thr>Pro。在INHBB基因区域检测到<5%的SSCP多态。在INHBA基因的区域同样显示小于5%的带型差异个体。
2、最小二乘分析显示,波尔山羊群体在651A>G位点上基因型组间第二胎产羔数差异显著(P<0.05),马头山羊及努比山羊群体在-446C>T位点上基因型组间第二胎产羔数均差异显著(P<0.05)。马头山羊群体在位点946A>C基因型组间第二胎产羔数差异极显著(P<0.01)。
3、卡方检验表明,波尔山羊群体样本在-446C>T、 651A>G和792T>C三个位点上及海门山羊群体样本在-155C>T、129G>A和651A>G不处于哈代温伯格平衡(P<0.05);在所发现的多态位点中,除-506->G、-155C>T和651A>G外的其它位点的基因型频率分布均与研究的群体关联。
4、4个中外山羊群体样本在INHA基因的外显子Ⅱ存在一个两位点的完全连锁不平衡;波尔山羊和海门山羊在INHA基因的外显子Ⅰ中存在另一个强的两位点连锁不平衡。
5、在波尔山羊和海门山羊两个群体样本中,在INHA基因外显子的1的-155、-65和129两两位点之间,以及-446与-65位点之间,在外显子2的651和792,792和906,792和911,792和946,906和946,以及911和946位点间,跨内含子的-506与567,-155与567,以及-65与567位点间发生M<,1>M<,1>M<,2>M<,2>、M<,1>M<,1>W<,2>M<,2>及W<,1>M<,1>M<,2>M<,2>三个特定的两位点组合基因型的贫乏甚至缺失。这个现象暗示含两个共线“突变型等位基因"的单倍体型的缺失。但在努比山羊中,-446与-65两个位点间的9种可能的基因型组合都被观察到,而且上述缺失的三种基因型组合也以一个充分的频率存在。