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背景与目的cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）是一种重要的核转录因子，能调控基因启动子中含有CRE（cAMP response element）序列的目的基因转录，具有复杂的生物学功能。大量研究表明CREB可能在急性呼吸窘迫综合征、肺动脉高压、糖尿病视网膜病变、卵巢过度刺激综合征等血管屏障破坏的疾病中发挥重要作用，其机制与CREB调控血管通透性和炎症反应等密切相关。然而CREB对血管内皮细胞功能的影响复杂，其在肺微循环屏障炎症损伤中是否起作用尚不清楚。本实验拟探讨CREB在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）致大鼠肺微血管内皮细胞（rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC）炎症损伤过程中的作用。方法体外分离培养RPMVEC，经不同浓度（0、0.1、1、10、100mg·L-1）LPS及不同时间（0、10、30、60、120min）处理，或PKA通路特异性抑制剂(PKI)预孵育30min。Western-blot法检测CREB磷酸化水平；伊文思蓝-白蛋白法（EBA）观察RPMVEC单层通透性的变化。结果1)体外成功分离、培养出RPMVEC，并经形态学及异硫氰酸标记的植物凝集素结合实验鉴定证实。2)随着LPS孵育浓度的增加（（0、0.1、1、10、100mg·L-1），RPMVEC中CREB（Ser-133）磷酸化水平逐渐增加；10mg·L-1LPS作用于RPMVEC后，CREB（Ser-133）磷酸化水平呈时间依赖性地增加，30min达高峰，随后逐渐下降，120min仍高于正常对照组。3) LPS亦呈时间依赖性地增加CREB表达，于1h开始升高，3h达峰值，随后逐渐下降，至孵育24h表达水平仍高于正常对照组。4)加入PKA特异性通路抑制剂PKI预孵育RPMVEC30min后，LPS诱导的CREB(Ser-133)磷酸化几乎被完全抑制,与单纯LPS刺激组比较，二者具有统计学差异（P <0.05）；PKI单独作用于RPMVEC30min后，与正常对照组比较，二者CREB（Ser-133）磷酸化水平无统计学差异（P＞0.05）。5)与正常对照组相比，10mg·L-1LPS刺激使RPMVEC的通透性显著增加（（P <0.05）；而10μmol·L-1PKI与10mg·L-1LPS共孵育后，RPMVEC通透性较单纯10mg·L-1LPS刺激组显著增加（P <0.05）；与正常对照组比较，PKI单独作用也可增加细胞单层通透性，差异具有统计学意义（P <0.05）。结论1) LPS呈浓度及时间依赖方式诱导RPMVEC中CREB（Ser-133）快速磷酸化，PKA通路介导了上述过程。2) CREB（Ser-133）磷酸化在LPS致RPMVEC炎症损伤过程中可能起到保护作用。