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食品安全作为国民安危的基本保障,受到各界的广泛关注和研究。其中,兽药滥用和微生物污染是影响食品安全的重要原因。泰乐菌素(Tylosin,TYL)是用于畜禽养殖和疫病防治的一种大环内酯类抗生素,长期使用后易在人体内蓄积、使病原菌产生耐药性,因此需要建立高灵敏检测TYL的方法。大肠杆菌0157:H7(Escherichia coli O157:H7,,E.coli O157:H7)、沙门氏菌(Salmonella serotype Choleraesui,S.Choleraesuis)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,L.monocytogenes)引起的食品安全问题层出不穷,对人类健康造成极大威胁,因此需要建立一种能够对多重致病菌实现同时检测的方法。杂交链式反应(Hybridization chain reaction,HCR)是一项高效的新型扩增技术,在恒温无需酶参与的条件下即可实现。本研究基于HCR实现了对TYL的高灵敏特异性检测和对多种病原体的同时检测。第一章对大环内酯类抗生素—泰乐菌素和食源性致病菌的危害、检测研究进展,以及杂交链式反应进行了综述。第二章建立了 HCR结合生物素-链霉亲和素信号放大检测TYL的方法。TYL作为一种抗生素在促进畜牧业发展的同时,对人类的健康造成了潜在威胁。本章首先制备TYL单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)应用于免疫学反应,并将生物素-链霉亲和素系统与HCR相结合实现信号双重放大。链霉亲和素(SA)和mAb标记于胶体金(AuNPs)上作为识别探针(mAb-Au-SA)。没有目标物存在时,通过免疫学反应形成TYL-CMO-OVA-mAb-Au-SA复合物,SA与生物素化的引发链(biotin-initiator)结合,加入发夹(H1和H2),biotin-initiator使发夹交替开环发生HCR。H1修饰的荧光基团作为信号输出。结果显示,在最优条件下,PBS中TYL的检测具有良好的特异性,检测限(Limit of detection,LOD)为0.39ng/mL,并且该方法可应用于牛奶和蜂蜜加标样中TYL的检测,LOD分别为 0.49 ng/mL 和 0.25 ng/mL。第三章构建了基于HCR的荧光多色ELISA平台检测致病菌。由于致病菌容易引起人类感染或中毒,且多种致病菌可能共存于同一样品中,因此建立一种能够特异、高灵敏对多种致病菌同时检测的方法十分必要。本章首先设计了三套杂交序列,每套的引发链(initiator)仅能引发匹配的H1和H2,并且每套序列的H1上分别标记了互不干扰的荧光基团。将双抗夹心的酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)与 HCR 相结合,存在目 标菌时,形成免疫夹心复合物,加入修饰了荧光基团的发夹对,发生HCR,形成多色的荧光级联体作为信号放大分子和输出分子。结果显示,该平台能够实现对E.coli O157:H7、S.Choleraesuis 和 L.monocytogenes的同时检测,LOD 分别为 3.4 ×101、6.4×100和7.0 × 101 CFU/mL,具有良好的特异性,并且该平台也可应用于加标牛奶样本中多重致病菌的检测。