第一部分健脾补肾疏肝活血法对RIF患者妊娠结局的影响【目的】探讨运用健脾补肾疏肝活血法治疗反复种植失败（Recurrent implantation failure,RIF）患者,治疗后再次予以冻融胚胎移植助孕,统计RIF患者的胚胎种植率、早期流产率以及临床妊娠率来进行疗效评价,为临床治疗RIF患者、改善妊娠结局提供新思路。【方法】收集2019年08月至2020年12月在中国科学技术大学第一附属医院（安徽省立医院）生殖中心行体外受精/卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植（IVF/ICSIET）的248例RIF患者的病例资料,根据随机数字表法将其分成对照组（128例）和观察组（120例）,受试者年龄均在2240岁。对照组RIF患者予以胚胎移植内膜准备等常规处理;观察组RIF患者在对照组处理基础上联合健脾补肾疏肝活血方口服,自月经周期第23天开始服用,直至移植后10天,连续服用13个月经周期。分析比较两组RIF患者的一般资料特征;分析比较两组RIF患者的基础FSH水平、促排卵次数、移植次数、移植胚胎数目;分析比较两组RIF患者治疗后再次移植时内膜准备方案及移植胚胎质量的分布情况;分析比较两组RIF患者的子宫内膜相关指标,包括子宫内膜厚度、子宫内膜形态、子宫动脉血流阻力（PI和RI）以及子宫内膜蠕动波频率（UPF）治疗前后的变化;此外,分析比较两组RIF患者治疗结束后再次进行冻融胚胎移植其妊娠结局的差异性。【结果】1.两组RIF患者一般资料比较纳入研究的RIF患者共248例,其中对照组RIF患者128例,平均年龄（32.16±3.51）岁,平均不孕年限（4.60±1.98）年,平均BMI（23.16±2.78）kg/m2,平均基础FSH水平（7.86±2.63）U/L;观察组RIF患者共120例,平均年龄为（32.29±3.62）岁,平均不孕年限（4.98±2.64）年,平均BMI（22.57±3.00）kg/m2;平均基础FSH水平为（7.74±2.41）U/L,两组RIF患者一般资料比较均无统计学意义,具有可比性（P>0.05）。2.两组RIF患者IVF相关资料比较和观察组RIF患者相比,对照组RIF患者平均促排卵次数（2.10±0.56次VS2.04±0.68次）、平均移植次数（3.50±0.59次VS 3.46±0.56次）以及平均移植胚胎数目（5.02±0.48个VS 5.00±0.61个）均稍高,但差异均无统计学意义,具有可比性（P>0.05）。治疗后再次移植时两组RIF患者内膜准备方案和移植胚胎质量的分布情况比较均无明显差异,具有可比性（P>0.05）。3.两组RIF患者子宫内膜指标比较3.1两组RIF患者子宫内膜厚度比较两组RIF患者治疗前基础子宫内膜厚度比较无明显差异,具有可比性（P>0.05）;治疗后HCG日对照组RIF患者子宫内膜厚度低于观察组（9.01±1.10 mm VS 9.63±1.12mm）,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.2两组RIF患者子宫内膜形态比较两组RIF患者治疗前A型子宫内膜形态占比及内膜形态分布比较均无明显差异性,具有可比性（P>0.05）;治疗后HCG日观察组RIF患者A型子宫内膜占比明显高于对照组RIF患者（80.00%VS 65.63%）,且两组间内膜形态分布具有明显差异性,差异有统计学意义（P<0.05）。3.3两组RIF患者子宫动脉血流阻力比较两组RIF患者治疗前子宫动脉血流阻力（PI和RI）比较差异不明显,无统计学意义,具有可比性（P>0.05）。治疗后两组RIF患者移植当天子宫动脉血流阻力均较治疗前降低,而观察组RIF患者下降更为明显,和对照组RIF患者相比差异明显,具有统计学意义（P<0.05）。3.4两组RIF患者子宫内膜蠕动波频率比较两组RIF患者治疗前子宫内膜蠕动波频率平均值及频率分布比较均无明显差异,具有可比性（P>0.05）。移植当天两组RIF患者平均子宫内膜蠕动波频率均较治疗前下降,且观察组RIF患者UPF明显低于对照组RIF患者,两组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后两组RIF患者子宫内膜蠕动波频率各组间分布均有明显差异,且观察组RIF患者UPF介于12次/分占比者明显高于对照组（54.17%VS 39.84%）,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.两组RIF患者妊娠结局比较观察组RIF患者的临床妊娠率（56.67%VS 35.94%）和胚胎种植率（35.23%VS 23.47%）均显著高于对照组RIF患者,而早期流产率则明显低于对照组RIF患者（13.24%VS 28.26%）,差异均具有统计学意义（P<0.05）。【结论】健脾补肾疏肝活血法能显著提高RIF患者的胚胎种植率及临床妊娠率,降低其早期流产率,其机制可能与增加子宫内膜厚度、降低子宫动脉血流阻力、改善子宫内膜形态以及降低子宫内膜蠕动波频率相关。第二部分健脾补肾疏肝活血法对RIF患者的免疫学机制研究【目的】探讨RIF发生的免疫学机制以及健脾补肾疏肝活血法对RIF患者NK细胞和Th1/Th2/Th17细胞因子的影响,拟从分子水平探讨RIF发生的内在机制以及中医药改善RIF患者妊娠结局的作用途径。【方法】收集2019年08月至2020年12月就诊于中国科学技术大学第一附属医院（安徽省立医院）生殖中心接受IVF-ET或ICSI-ET助孕的40例RIF患者作为研究对象,根据是否接受健脾补肾疏肝活血法治疗作为分组条件,未接受中药治疗者分为B组（20例）,接受中药治疗者为C组（20例）,治疗方法同前;同时收集首次冻融胚胎移植即成功分娩的20例患者作为正常妊娠组即A组,研究对象年龄均在2240岁。三组患者均于定移植日当天,抽取清晨空腹肘静脉血4ml5ml,采用流式细胞术进行NK细胞（NK细胞比例、NK细胞活性、颗粒酶B、IFN-γ和CD-107a）和Th1/Th2/Th17细胞因子（白介素-2、肿瘤坏死因子α、白介素-10、干扰素γ、白介素-6、白介素-4及白介素-17A）的检测。应用SPSS 21.0软件进行统计分析,比较三组之间NK细胞和Th1/Th2/Th17细胞因子之间的差异性并进行分析。【结果】1.三组患者NK细胞比例、活性、颗粒酶B、IFN-γ和CD-107a结果比较和正常妊娠A组患者相比,西医治疗B组和中西医治疗C组RIF患者NK细胞比例、CD-107a均显著偏高,且差异具有统计学意义（P<0.05）;而B组和C组组间比较无明显差异,不具有统计学意义（P>0.05）。和B组RIF患者相比,正常妊娠A组患者和C组RIF患者NK细胞活性和颗粒酶B比例明显偏低,差异均有统计学意义（P<0.05）;而A组和C组患者组间比较无明显差异。三组之间IFN-γ的比较均无明显差异,不具有统计学意义（P>0.05）。2.三组患者Th1/Th2/Th17细胞因子结果比较在IL-4细胞因子水平方面,B组RIF患者明显低于正常妊娠A组患者,差异具有统计学意义（P<0.01）;而C组RIF患者虽高于A组患者、低于B组患者,但C组与B组、C组与A组之间均无明显差异,均不具有统计学意义（P>0.05）。在IFN-γ细胞因子水平方面,B组和C组RIF患者均显著高于A组患者,差异均具有统计学意义（P<0.05）;但B组和C组两组之间差异不具有统计学意义（P>0.05）。在IL-17A细胞因子水平方面,B组RIF患者显著高于A组和C组患者,且差异均有统计学意义（P<0.01）;而C组患者IL-17A细胞因子虽高于A组患者,但差异不具有统计学意义（P>0.05）。其余细胞因子水平三组之间比较均无明显差异,不具有统计学意义（P>0.05）。【结论】RIF的出现可能是由于外周血Th1/Th2/Th17细胞因子平衡遭到破坏即IL-4降低、IFN-γ和IL-17A的升高以及NK细胞活性异常升高的缘故,从而干扰胚胎着床,降低妊娠率;健脾补肾疏肝活血法可能通过降低NK细胞活性、granzyme B和IL-17A细胞因子的水平,进而达到调节免疫、改善妊娠结局的目的。