背景绒毛钩藤为茜草科钩藤属蔓生木本植物绒毛钩藤Uncaria tomentosa(Willd.)DC.的干燥藤茎,俗称“猫爪藤”(Cat’s Claw)。该植物原产于秘鲁、厄瓜多尔等中美洲的热带雨林地区,因其叶基部生有锐利成双的爪状曲钩而得名。据报道,绒毛钩藤具有免疫增强,对DNA修复的增强,抑制肿瘤细胞的增殖,抑制化疗所引起的白细胞减少,抗遗忘,抗炎等作用。传统上用猫爪藤治疗溃疡、风湿性关节炎、肿瘤以及防治白血病、艾滋病等。20世纪70年代起,国外陆续开展了猫爪藤的化学成分、药理作用和临床应用研究,证实了该植物药的很多传统功效,并发现该药可以帮助抵御很多困扰现代人的疑难杂症。绒毛钩藤也因此逐步成为国际市场上热销的草药。绒毛钩藤与钩藤同为茜草科钩藤属植物,其主要化学成分相似,均为生物碱,并以吲哚类生物碱为主。绒毛钩藤与国产钩藤化学成分上的相似性,决定了它们的药理作用也有相似之处。中药钩藤作为平肝息风药,其主要功效是对中枢神经系统的抑制作用和降血压作用,绒毛钩藤是否具有与国产钩藤相同的中枢抑制功效和心血管效应?目前对绒毛钩藤的中枢作用及心血管作用尚未见报道。本文将对绒毛钩藤在中枢神经系统方面的药理作用进行初步研究,并通过高血压动物模型,观察绒毛钩藤对大鼠血压的影响,探讨其作用机制,为该植物药的进一步开发利用提供实验依据,并有利于钩藤属植物的资源研究开发。目的研究秘鲁产绒毛钩藤的镇静催眠和抗惊厥作用,降血压作用及有关机制,并与国产钩藤进行比较。方法1.小鼠自发活动试验:昆明种小鼠50只,雌雄各半,禁食12h,饮水不限。将小鼠随机分为5组,即空白对照组(同容量生理盐水组),国产钩藤组(320mg/kg)和绒毛钩藤低(80mg/kg)、中(160mg/kg)、高(320mg/kg)三剂量组。将各组小鼠放入YLS-1A多功能小动物自主活动记录仪中,适应5 min后,测定小鼠给药前的自主活动次数,记录时间为5 min。记录时室内保持安静。然后按剂量给各组小鼠灌胃给药(ig)。分别于给药后30 min、60 min各测定1次自发活动数,记录5min内各组小鼠的活动数。2.戊巴比妥钠阈下睡眠剂量诱导小鼠入睡试验:取昆明种小鼠50只,雌雄各半。分组同上,每组10只动物。按各组剂量给小鼠ig给药,药后60 min后给每只小鼠腹腔注射戊巴比妥钠30 mg/kg,以小鼠翻正反射消失1min以上为入睡标准,记录15 min内各组小鼠的入睡个数。3.戊巴比妥钠阈剂量诱导小鼠睡眠时间试验:取昆明种小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组。分组同上,每组10只动物。按各组剂量给小鼠ig给药,药后60 min后给每只小鼠腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg,然后记录各组小鼠的睡眠时间(以给药后小鼠翻正反射消失为入睡时间,翻正反射消失至恢复为睡眠时间)。4.硫酸士的宁致小鼠惊厥试验:取昆明种小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,分组同上,每组10只动物。按各组剂量给小鼠ig给药,给药后60min,腹腔注射硫酸士的宁(2mg/kg),记录注射士的宁后2 h内惊厥小鼠数和死亡小鼠数,惊厥反应以小鼠出现四肢阵挛或强直性惊厥为指标。5.大鼠高血压模型复制:对大鼠采用低频、低压交流电电击足底作并结合噪声的复合刺激为应激源,对大鼠实施反复应激刺激28d,建立稳定的慢性应激性高血压动物模型。应用大鼠尾动脉血压计反复测量3次,取均值,以收缩压大于18.7Kpa(140mmHg),舒张压大于12.0Kpa(90mmHg)为模型成功的标志,不成功的动物予以剔除。6.大鼠高血压模型实验分组:取血压符合实验要求的动物(正常对照组除外),随机分为3组,每组10只,分别为模型对照组(给等量蒸馏水),绒毛钩藤组(120mg/kg)和国产钩藤组(120 mg/kg),另取10只大鼠设立正常对照组(给等量蒸馏水)。7.大鼠高血压模型检测指标:造模前、后和实验结束后每只动物连续3次测量尾动脉血压,取平均值。实验结束后,经大鼠腹主动脉取血2ml,注入含100 g/L的EDTA-Na2和抑肽酶的试管中混匀,4℃条件下离心分离血浆,-20℃保存备用。测定前室温复溶,再次离心取上清液,采用放射免疫分析法测定各组动物血浆中AngⅡ、ET和CGRP的含量。8.统计方法:应用SPSS 13.0统计软件处理数据,实验数据以(?)±s表示,采用重复测量方差分析,单因素方差分析,组间多重比较方差齐时用LSD方法,不齐时用Games-Howell方法。计数资料采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。结果1.药物对小鼠自主活动的影响。结果表明,时间点和组别之间有交互作用(F=4.065,P=0.000);组别之间有主效应(F=8.201,P=0.000);各时间点之间有主效应(F=41.712,P=0.000)。空白对照组给药前后小鼠自发活动次数未见变化(P＞0.05)。药后30min,国产钩藤组小鼠的自发活动减少,与给药前相比,差异显著(P＜0.01),与空白对照组比较,也有显著差异(P＜0.01);而绒毛钩藤低、中、高三剂量组小鼠自主活动数未见改变,与给药前相比及与空白对照组比较,均无差异(P＞0.05)。绒毛钩藤低、中、高三剂量组小鼠药后30min的自主活动数与国产钩藤组比较,则有显著差异(P＜0.01)。药后60min,国产钩藤组及绒毛钩藤低、中、高三剂量组小鼠的自发活动均减少,与给药前相比,差异显著(P＜0.05);与空白对照组比较,也有显著差异(P＜0.01);而绒毛钩藤低、中、高三剂量组与国产钩藤组比较,则无显著性差异(P＞0.05)。2.药物对戊巴比妥钠阈下睡眠剂量致小鼠入睡个数的影响:空白对照组在腹腔注射阈下睡眠剂量的戊巴比妥钠(30 mg/kg)后,翻正反射消失小鼠为3只。国产钩藤组及绒毛钩藤低剂量组各有8只小鼠入睡,绒毛钩藤中、高剂量组则各有9只小鼠入睡。小鼠入睡个数经x~2检验表明,x~2=13.098,v=4,P=0.011(双侧),差异有显著性意义,可认为5个实验组之间的差异有显著性意义,其中绒毛钩藤中、高剂量组小鼠的入睡个数最多。3.药物对戊巴比妥钠阈下睡眠剂量致小鼠入睡时间的影响:各组小鼠睡眠时间数据经one-way ANOVA分析表明组间有显著性差异(F=24.304,P=0.000),需进一步两两比较(采用LSD法)。结果:空白对照组与绒毛钩藤低剂量组无显著差异(P=0.379),而与其他各组比较有显著差异(P＜0.01)。国产钩藤组与绒毛钩藤高剂量组比较无显著差异(P=0.343),与其他各组比较有显著差异。(P＜0.05)。结果表明,国产钩藤及绒毛钩藤给药后均可使戊巴比妥钠阈剂量所致小鼠睡眠持续时间延长,绒毛钩藤的作用随剂量加大而加强。4.药物对硫酸士的宁致小鼠惊厥作用的影响:给小鼠腹腔注射士的宁(2mg/kg)后,小鼠多在10 min内出现强直性惊厥和死亡。各组小鼠惊厥个数经x~2检验,结果表明,x~2=2.500,v=4,P=0.645(双侧),差异无显著性意义,可认为5个实验组之间的小鼠惊厥个数无显著性差异。空白对照组死亡小鼠为8只。国产钩藤组有2只小鼠死亡,绒毛钩藤低、中、高剂量组死亡小鼠分别为6、4、2只。小鼠死亡个数经x~2检验,结果表明,x~2=11.303,v=4,P=0.023(双侧),差异有显著性意义,可认为5个实验组之间的差异有显著性意义,其中国产钩藤组和绒毛钩藤高剂量组小鼠的死亡个数最少。5.药物对模型大鼠血压的影响。对收缩压的影响:时间点和组别之间有交互作用(F=16.240,P=0.000);组别之间有主效应(F=9.951,P=0.000);各时间点之间有主效应(F=98.796,P=0.000),各时间点采用one-way ANOVA,各组之间采用的是共有时间点主效应的重复测量方差分析。造模前收缩压,各组之间均无显著差异(P＞0.05)。造模后收缩压,模型对照组、绒毛钩藤组和国产钩藤组和正常对照组比较都有显著差异(P=0.000),但三组之间无显著差异(P＞0.05)。治疗后收缩压,绒毛钩藤组、国产钩藤组和正常对照组和模型对照组比较均有显著差异(P=0.000),但三组间无显著差异(P＞0.05)。对舒张压的影响:时间点和组别之间有交互作用(F=3.388,P=0.009);组别之间无主效应(F=1.634,P=0.199);各时间点之间有主效应(F=17.661,P=0.000),各时间点采用one-way ANOVA,各组之间采用的是共有时间点主效应的重复测量方差分析。造模前舒张压,各组之间均无显著差异(P＞0.05)。造模后舒张压,模型对照组(P=0.028)、绒毛钩藤组(P=0.027)和国产钩藤组(P=0.014)和正常对照组比较都有显著差异,但三组之间无显著差异(P＞0.05)。治疗后舒张压,正常对照组(P=0.014)、绒毛钩藤组(P=0.013)和国产钩藤组(P=0.008)和模型对照组比较均有显著差异,但三组间无显著差异(P＞0.05)。总之,建立模型前3组动物的血压经统计学处理差异无显著性(P＞0.05),建立模型后,动物血压均升高(P＜0.05),治疗7天后,模型组动物的血压未见明显变化(P＞0.05);绒毛钩藤组和国产钩藤组的血压均下降显著(P＜0.01)。组间比较,两给药组与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),但两给药组组间无显著性差异(P＞0.05)。6.药物对高血压大鼠血浆AngⅡ、ET和CGRP的影响:模型组AngⅡ和ET水平升高,与正常对照组和国产钩藤、绒毛钩藤组比较,有显著性差异(P＜0.05)。模型组CGRP水平下降,与国产钩藤组、绒毛钩藤组及正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01)。结论1.绒毛钩藤醇提物能够显著降低小鼠的自主活动,增加翻正反射消失的小鼠数,延长小鼠睡眠时间。绒毛钩藤具有与国产钩藤相似的镇静催眠作用。2.绒毛钩藤能减少士的宁引起的惊厥小鼠的死亡数,但对小鼠发生惊厥的个数影响不明显。绒毛钩藤的抗惊厥作用与国产钩藤相似。3.绒毛钩藤与国产钩藤同样具有降压作用,其降血压作用可能与对肾素-血管紧张素-醛固酮系统的调节有关。