【摘 要】
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目的通过构建小鼠NEC模型,动态观察小鼠NEC发生发展过程中肠道通透性、巨噬细胞极化情况和相关炎症因子水平变化并探究巨噬细胞极化的可能机制,为NEC的临床诊疗及护理提供一定的理论依据。方法选用SPF级C57BL/6小鼠建立NEC模型。将早产小鼠随机分为对照组（Control,n=50）与NEC组（NEC,n=50）。对照组小鼠由母鼠母乳喂养,NEC组小鼠给予缺氧、冷刺激、高渗喂养和脂多糖处理。小鼠
【基金项目】
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国家自然科学基金“巨噬细胞与固有淋巴细胞相互调控在NEC发病中的作用及机制研究”（81601330）; 湖北省自然科学基金“巨噬细胞诱导肠道固有淋巴细胞表型转化在调控NEC炎症反应的机制研究”（2019CFB516）
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目的通过构建小鼠NEC模型,动态观察小鼠NEC发生发展过程中肠道通透性、巨噬细胞极化情况和相关炎症因子水平变化并探究巨噬细胞极化的可能机制,为NEC的临床诊疗及护理提供一定的理论依据。方法选用SPF级C57BL/6小鼠建立NEC模型。将早产小鼠随机分为对照组（Control,n=50）与NEC组（NEC,n=50）。对照组小鼠由母鼠母乳喂养,NEC组小鼠给予缺氧、冷刺激、高渗喂养和脂多糖处理。小鼠出生后0h、24h、48h、72h、96h,每组每个时间点处死10只,收集十二指肠下端至结肠部肠道组织。1.HE染色观察建模0h、24h、48h、72h、96h小鼠肠道组织形态。2.FD70灌胃检测建模0h、24h、48h、72h、96h小鼠肠道通透性。3.TUNEL染色检测建模96h小鼠肠道上皮细胞凋亡情况。4.流式细胞术检测建模0h、24h、48h、72h、96h小鼠肠道M1型、M2型巨噬细胞比例。5.ELISA检测建模0h、48h、96h细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ和HMGB-1浓度水平。6.Westernblot检测建模96h巨噬细胞极化信号转导通路JAK2、STAT3、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平。结果1.小鼠建模情况对照组小鼠生长发育状况良好;NEC组小鼠出现不同程度的喂养困难,生长发育迟缓,体格瘦小,精神状态不佳,腹胀、排便异常等状况。2.小鼠肠道结构与功能情况（1）HE染色结果显示,建模过程中对照组小鼠肠道无损伤;NEC组小鼠肠道组织损伤则逐渐加重;（2）NEC组小鼠肠道通透性在建模过程中逐渐增强,与同时间点对照组相比,NEC组小鼠血浆光密度值在建模48h、72h,96h出现显著增高（p<0.05）;（3）建模96h时NEC组小鼠肠上皮细胞凋亡增多（1.9%±1.1%vs.7.6%±2.6%,p<0.01）。3.巨噬细胞极化情况（1）NEC组小鼠肠道M1型巨噬细胞比例逐渐增高,至48h处达到峰值,随后降低,但仍处于较高水平;与同时间点对照组相比,NEC组小鼠肠道M1型巨噬细胞比例在48h、72h和96h显著增高（p<0.01）;（2）NEC组小鼠肠道M2型巨噬细胞比例逐渐降低,至24h处达到峰值,随后升高,但仍处于较低水平;与同时间点对照组相比,NEC组小鼠肠道M2型巨噬细胞比例在48h和72h显著增高（p<0.01）;（3）NEC组小鼠肠道CD86+CD206+巨噬细胞比例逐渐增高;与同时间点对照组相比,NEC组小鼠肠道CD86+CD206+巨噬细胞比例在48h、72h和96h显著增高（p<0.01）;（4）NEC组小鼠肠道M1/M2型巨噬细胞比例逐渐增高,至48h处达到峰值,随后降低,但仍处于较高水平。与同时间点对照组相比,NEC组小鼠肠道M1/M2型巨噬细胞比例在24h、48h、72h和96h显著增高（p<0.01）。4.细胞因子浓度水平变化与同时间点对照组相比,NEC组小鼠肠道组织炎症因子IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-12、HMGB-1浓度水平在48h和96h显著升高（p<0.01）。5.信号通路检测结果建模96h时,与对照组相比,NEC组小鼠p-JAK2（0.35±0.13 vs.1.00±0.25）、p-STAT3（0.36±0.12 vs.0.84±0.14）蛋白表达水平显著升高（p<0.05）。结论1.肠道结构及功能损伤是NEC发病的形态学基础及始动因素。2.NEC发病的过程中出现M1型与M2型巨噬细胞比例失调,表现为促炎型M1型巨噬细胞显著增多并伴有大量炎症因子释放。3.巨噬细胞极化可能是受到JAK2/STAT3信号通路调控。4.本实验结果为提升早产儿护理水平,预防NEC发生具有一定启示意义。
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