塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29 MicroRNA表达谱的影响及其机制的实验研究

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目的研究塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29的生长抑制作用及其对HT-29细胞microRNA(miRNA)表达谱的影响。方法采用CCK-8比色还原法观察塞来昔布对HT-29细胞的生长抑制作用;计算其半数抑制浓度(IC50),以IC50浓度作用于HT-29细胞48 h后,提取总RNA,采用illumina microRNA芯片技术检测microRNA的表达变化,采用实时定量PCR技术对芯片检测结果进行验证。选取经miRNA芯片筛选得到溶媒对照组和塞来昔布药物干预组差异表达miNRAs,三个靶基因预测软件(miRNAs,RNAHybrid,Targetscan)预测这些差异表达miNRAs的靶基因,结果取可信度较高的前100个结果的并集,并对特异性靶基因进行enrichment分析和pathway分析。结果塞来昔布对HT-29细胞有显著的生长抑制作用,且呈剂量-时间效应关系,其半数抑制浓度为237.73±1.65μmol/L;塞来昔布作用于HT-29细胞48 h后,获得28个与塞来昔布干预相关的microRNAs,其中高表达有20个(HS188,HS203,HS22.1,HS243.1,HS43.1,hsa-let-7f-1*,hsa-let-7i*,hsa-miR-129-3p,hsa-miR-1303,hsa-miR-141 , hsa-miR-142-5p , hsa-miR-301a , hsa-miR-30c-1* , hsa-miR-33b ,hsa-miR-570,hsa-miR-647,hsa-miR-886-3p,solexa-2526-361,solexa-499-2217,solexa-826-1288,低表达8个(HS58,hsa-miR-1244,hsa-miR-1268,hsa-miR-26a-1*,hsa-miR-552,hsa-miR-622,solexa-3044-295,solexa-603-1846),经实时定量PCR验证miR-26a-1*、miR-142-5P,其表达与芯片结果一致。对其差异表达miNRAs进行靶基因的预测,发现每个miRNA可调控多个靶基因,对特异性靶基因进行enrichment分析和GeneGo通路分析。提示hsa-miR-570的靶基因参与的通路中可能性最大是WNT通路,其调控的靶基因是该通路中的核心分子。结论塞来昔布对microRNA表达谱的影响可能是其抑制HT-29细胞株生长的作用途径之一,其差异性microRNA调控的靶基因参与的相关通路可能是其抑制HT-29细胞株生长的具体分子机制之一。
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