论文部分内容阅读
目的:研究低氧条件下,血清应答因子(serum response factor,SRF)是否调控结缔组织生长因子(basic fibroblast growth factor,CTGF)参与诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。方法:取健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体外分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,传至3代进行鉴定及后续实验。分别在1%、2%、5%、10%、21%氧浓度下培养大鼠大鼠肺动脉平滑肌细胞,在24小时、48小时、72小时后观察细胞生长趋势,确立实验最佳低氧浓度。在常氧及最佳低氧浓度下培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,检测两组中SRF及CTGF表达情况。设计出针对大鼠SRF-siRNA、CTGF-siRNA序列,实验分为5组:常氧组、低氧组、低氧+NC-siRNA组、低氧+SRF-siRNA组、低氧+CTGF-siRNA组,用荧光定量PCR、Western-blot法分别检测各组中SRF及CTGF的m RNA与蛋白的表达情况。采用MTT法,检测各组(常氧组,低氧组,低氧+NC-siRNA,低氧+SRF-siRNA,低氧+CTGF-siRNA)大鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖活性。结果:72小时后观察,发现各个浓度氧条件下培养的细胞增殖出现明显差异,1%O2组增殖活性最高,最佳低氧浓度设定为1%O2。低氧(1%O2)组中SRF、CTGF的m RNA及蛋白的表达比常氧组明显增高。低氧(1%O2)条件下用SRF-siRNA转染SRF-siRNA组大鼠肺动脉平滑肌细胞、CTGF-siRNA转染CTGF-siRNA组大鼠肺动脉平滑肌细胞,荧光定量PCR检测发现SRF-siRNA组与余下4组相比SRF m RNA的表达明显受到抑制,而低氧组、低氧+NC-siRNA及CTGF-siRNA组相比SRF m RNA的表达相似。SRF-siRNA组和CTGF-siRNA组中CTGF m RNA的表达与低氧组及低氧+NC-siRNA相比均明显受到抑制。说明SRF调控CTGF的表达。MTT法检测发现低氧组与低氧+NC-siRNA组中大鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖活性最高,低氧+SRF-siRNA组与低氧+CTGF-siRNA组大鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖活性与低氧组相比明显受到抑制,其中低氧+SRF-siRNA组抑制更明显。结论:本课题结果表明大鼠肺动脉平滑肌细胞在低氧条件下增殖活跃,低氧条件下SRF通过调控CTGF促进大鼠肺动脉平滑肌细胞异常增殖。