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第一部分 IVIM参数与乳腺癌免疫因子ER、PR、HER-2、Ki-67的相关性研究目的:探讨体素内不相关运动(Introvoxel Incoherent Motion,IVIM)模型参数与乳腺癌雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)、孕激素受体(Progesterone Receptor,PR)、人表皮生长因子受体-2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER-2)和增殖标志物Ki-67表达相关性。方法:选取2015年8月到2018年8月期间在我院接受治疗的可疑乳腺癌患者152例,均进行常规T2WI脂肪抑制序列、T1WI、弥散加权成像(Diffusion Weighted Imaging,DWI)、动态对比增强磁共振成像(Dynamic Contrast-Enhanced Magnetic Resonance Imaging,DCE-MRI)扫描和IVIM科研序列的扫描,采用相关软件计算表观扩散系数(Apparent Diffusion Coefficient,ADC)、单纯扩散系数(pure Diffusion Coefficient,D)、假性扩散系数(pseudo-Diffusion Coefficient,D*)、灌注分数(perfusion fraction,f)等参数,检测所有患者肿瘤组织中的ER、PR、HER-2、Ki-67表达情况。结果:根据研究的排除和入组标准,最终入组研究乳腺癌病例90例,在这些患者中,ER患者阳性73例,占81.92%,阴性17例,占18.08%;PR患者阳性70例,占77.78%,阴性20例,占22.22%;HER-2 阳性33例,占36.67%,阴性57例,占63.33%;Ki-67阳性59例,占65.56%,阴性31例,占34.44%。ER、PR阳性表达与阴性表达之间的ADC值、D值、D*值、f值比较无统计学差异(P>0.05),HER-2阳性表达与阴性表达之间的ADC值、f值比较无统计学差异(P>0.05),HER-2阳性表达的D值、D*值高于HER-2阴性表达的D值、D*值(P<0.05);Ki-67阳性表达与阴性表达之间的D*值和f值比较无统计学差异(P>0.05),Ki-67阳性表达的ADC值、D值低于Ki-67阴性表达的ADC值、D值(P<0.05)。Spearman相关分析结果:ADC与ER因子表达情况呈负相关,D值与HER-2因子呈正相关,D值与Ki-67呈负相关;D*值与HER-2因子呈正相关(均为P<0.05)。结论:根据ADC值、D值、D*值在乳腺癌免疫因子ER、HER-2及Ki-67阴阳表达情况的组间差异,以及ADC值与ER、D值与HER-2和Ki-67、D*值与HER-2表达情况的相关关系,提示IVIM参数可以有助于分析乳腺癌部分免疫因子的表达情况,进而分析患者的预后。第二部分 DKI参数在乳腺癌病理分级及与免疫因子的相关性研究目的:评价MR扩散峰度成像(Diffusion Kurtosis Imaging,DKI)在乳腺癌病理分级中的应用及DKI参数与乳腺癌雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)、孕激素受体(Progesterone Receptor,PR)、人表皮生长因子受体-2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER-2)和增殖标志物Ki-67表达相关性。方法:选取2015年8月到2018年8月期间在我院接受治疗的可疑乳腺癌患者168例。所有患者术前进行乳腺磁共振常规T2WI脂肪抑制序列、T1WI、弥散加权成像(Diffusion Weighted Imaging,DWI)、动态对比增强磁共振成像(Dynamic Contrast-Enhanced Magnetic Resonance Imaging,DCE-MRI)扫描以及基于 b 值为 0,1000,2000 sec/mm2的DKI模型计算平均扩散率(mean diffusivity,MD)和扩散峰度平均值(mean kurtosis,MK)值。通过SPSS软件,应用Spearman分析上述参数值与乳腺癌病理分级及与ER、PR、HER-2、Ki-67的组间差异及相关性。结果:根据研究的排除和入组标准,最终入组研究乳腺癌病例108例,在这些患者中,MD,MK值在不同分级乳腺癌之间差异有统计学意义(P<0.05),III型乳腺癌组MK值大于II型乳腺癌组,III型乳腺癌组MD值小于II型乳腺癌组。在对ER、PR、HER-2、Ki-67阴阳表达情况组间的统计学分析发现,MD值在ER、PR、Ki-67阴阳表达组间存在统计学差异(P<0.05),MK值仅在Ki-67阴阳表达组间存在显著统计学差异(P<0.05)。Spearsman相关分析显示,MD值与病理分级呈负相关(r=-0.43,p<0.05),MK 值与病理分级呈正相关(r=0.48,p<0.05),MD 值与 Ki-67表达呈负相关(r=-0.39,P<0.05),MK值与Ki-67表达呈正相关(r=0.56,P<0.05)。结论:DKI定量参数在评价乳腺癌分级方面有重要的应用价值,MD值和MK值在部分免疫因子组间存在差异,并且与Ki-67表达存在一定的相关关系。DKI在评估乳腺癌肿瘤细胞增殖活性方面可以提供有价值的信息,MD值和MK值可以作为乳腺癌病理分级和预后因子表达的提示指标,从而可以间接评估乳腺癌的预后和治疗效果。第三部分 siRNA干扰乳腺癌原代细胞HER-2和Ki-67表达的实验研究目的:通过体外实验研究siRNA对乳腺癌肿瘤细胞的干扰作用及抑制作用,为siRNA技术用于乳腺癌治疗提供实验基础支持数据。方法:DKI和IVIM对乳腺癌肿瘤患者进行术前检查,病理确诊后,选取其中Ki-67及HER-2高表达的患者样本。采用组织块培养法制备乳腺癌原代肿瘤细胞,并利用胰酶消化选择法进行纯化,建立肿瘤细胞库。根据人HER-2及Ki-67基因编码序列,利用pSlience载体质粒构建特异性的HER-2 siRNA、Ki-67 siRNA质粒以及只含GFP的无关序列质粒。通过试剂盒将质粒转染到原代肿瘤细胞中,以原代肿瘤细胞为阴性对照,只含GFP质粒的为阳性对照,含HER-2 siRNA序列为HER-2干扰组及含Ki-67 siRNA序列为Ki-67干扰组。观察经siRNA干扰前后Ki-67、HER-2 mRNA表达水平变化,细胞周期变化,肿瘤细胞凋亡情况及侵扰能力。结果:经siRNA转染后,Ki-67、HER-2干扰组中转染效率伴随着时间的上升而上升,呈现递增趋势,96h时达到最大值,随后趋于缓和。原代细胞组无荧光出现,阳性对照组出现明显荧光。以转染率最高的时间点(96h)为样本,采用RT-PCR技术检测siRNA对制备成功的28例患者的乳腺癌肿瘤细胞株的Ki-67、HER-2 mRNA表达抑制作用,原代细胞组及阳性对照组几乎无差异,Ki-67组mRNA的表达量明显被Ki-67 siRNA干扰所抑制,HER-2组mRNA的表达量明显被HER-2 siRNA干扰所抑制。与阴性对照组相比siRNA干扰组细胞G0/G1细胞数目显著增多,而S期细胞数目显著减少,G2/M期细胞与阴性对照组相比无显著性差异。阳性对照组细胞与阴性对照组各期相比均无显著性差异。siRNA干扰组通过小室人工基底膜(Matrigel)的细胞数分别与阴性对照组和阳性对照组相比显著减少,并且具有统计学意义。细胞划痕实验结果表明,原代细胞组与阳性对照组在96h的迁移率明显高于Ki-67干扰组及HER-2干扰组。表明SiRNA干扰肿瘤细胞后,细胞的迁移能力受到显著影响。结论:利用siRNA技术干扰HER-2和Ki-67表达可以有效降低肿瘤细胞生长和增殖活性,促进肿瘤细胞凋亡,降低肿瘤细胞侵袭力。