利用噬菌体肽库筛选Survivin结合肽

来源 :内蒙古医学院 内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lizheng124128
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目的将纯化的Survivin蛋白作为诱饵,从噬菌体肽库中筛选出结合肽,针对Survivin蛋白的小肽物质,可望成为一类新的临床治疗肿瘤药物,同时也为蛋白质相互作用的机理研究提供新的思路。方法用纯化的Survivin蛋白包被35mm的塑料培养皿,加满封阻液封闭后,TBST缓冲液洗板,加入随机12肽的噬菌体肽库,除去未结合的噬菌体,再用靶分子溶液竞争性洗脱结合的噬菌体,通过测定噬菌体滴度检测Survivin蛋白的吸附、富集效果,筛选阳性噬菌斑,制作DNA测序模板进行测序,据此推导结合随机多肽的氨基酸序列。结果经3轮筛选,噬菌体显示有良好的富集效果。从第3轮筛选产物中挑取8个蓝色噬菌斑(阳性克隆)进行测序,DNA测序结果表明,具有一致性序列GI-ANNFFTLKIS。结论从噬菌体随机肽库中,筛选到能与Survivin蛋白特异性结合的一段短肽,为Survivin蛋白的进一步研究奠定基础。
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