苹果真菌病尤其是斑点落叶病(AlternariaLeafSpot)、褐斑病(Marssoninacoronaria(Ell.etDaris)Daris)轮纹病(Physalosporapiricola)、腐烂病(Valsamali)等是为害苹果的主要真菌病害，成为影响苹果生产的主要限制因子之一。利用多个防卫基因的协同作用是一个有效的选育抗病新品种的研究策略。 通过研究影响再生的因素，优化了嘎拉叶片、富士茎段再生体系；通过对影响农杆菌介导苹果遗传转化因素的研究，建立了农杆菌介导的嘎拉叶片遗传转化体系。主要利用叶盘法转化受体材料，将β-1，3-葡聚糖酶及几丁质酶基因导入苹果中，获得了嘎拉苹果转化植株。主要研究结果如下： 1.获得了稳定的苹果离体叶片再生体系 通过调整培养基、植物生长调剂浓度及配比、暗培养时间、不同部位叶片、叶片极性等因素，确立了嘎拉和长富2号叶片再生体系，发现在分别含BA5.0mg·L-1+NAA0.4mg·L-1和TDZ4.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1的MS培养基上，以嘎拉叶片远轴面和长富2号近轴面接触培养基，经过20d左右的暗培养可获得不定芽和再生植株，嘎拉和长富2号叶片再生率分别达到100％和60％。 2.获得了长富2号黄化茎段离体再生植株 通过研究基本培养基、植物生长调节剂的配比及组合对黄化茎段再生的影响，获得了长富2号黄化茎段的离体再生植株，再生频率为83％，高于叶片。建立了长富2号黄化茎段的再生体系。 3.通过对抗生素浓度对不定芽再生影响的研究，优化确定了适宜的选择压在嘎拉、富士苹果转化体系建立中，以Cef300mg·L-1和Km10mg·L-1作为适宜的抑菌素浓度和选择压，再生芽在含Km10mg·L-1的培养基上筛选，经3～4次选择继代后，获得了嘎拉苹果的抗性芽，然后再进行扩繁和在含Km10mg·L-1的选择培养基上选择生根培养。 4.建立了嘎啦苹果的遗传转化体系，并将β-1，3-葡聚糖酶及几丁质酶基因导入嘎拉苹果中 通过对影响农杆菌侵染的多个因素如农杆菌悬浮培养基、农杆菌菌液浓度、处理时间、共培养时间及抗生素浓度的优化筛选，建立了农杆菌介导的苹果双价基因的遗传转化体系。在本研究试验条件下，外源基因的转化效率嘎拉高于富士；同时发现延迟选择培养可明显提高共培养后的再生芽数。通过根癌农杆菌介导法将β-1，3-葡聚糖酶及几丁质酶基因导入苹果中，获得了抗性植株，其通过了Km抗性筛选。 5.经PCR检测获得了呈阳性的转化植株 将含有β-1，3-葡聚糖酶及几丁质酶基因的质粒EHA105导入苹果中，获得29株抗性株系，经过PCR检测，有2株呈阳性。PCR分子生物学检测结果初步表明，外源基因已经整合到嘎拉苹果植株中。