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目的:前列腺癌是男性中最常见的实体器官恶性肿瘤,发病率超过肺癌和结肠直肠癌,并且由于高转移率,它是美国男性肿瘤相关死亡的第二大原因[1]。全世界有15%的患者有前列腺癌家族史。近年来,前列腺癌在中国的发病率也迅速升高。目前,随着基因芯片测序技术的发展,越来越多的lncRNA被鉴定出来,lncRNA在癌症中的功能被广泛研究。为了阐明与前列腺癌有关的lncRNA的调控机制,寻找潜在的前列腺癌临床诊断标志和潜在的治疗靶点,我们课题组通过TCGA和Taylor前列腺癌患者数据库数据分析以及基因簇富集分析方法分析得到lncRNA SNHG7和miR-503与前列腺癌发生发展具有相关性。实验结果发现,lncRNA SNHG7在前列腺癌组织中表达量升高,miR-503在前列腺癌组织中表达量降低。本文首先明确lncRNA SNHG7和miR-503在前列腺癌中的表达情况以及lncRNA SNHG7对前列腺癌细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡以及细胞表型的影响,然后进一步研究lncRNA SNHG7与miR-503相互作用以及lncRNA SNHG7对miR-503靶蛋白的影响,最终探究lncRNA SNHG7影响前列腺癌细胞表型变化的分子机制。研究lncRNA SNHG7在前列腺癌发生发展中的相关机制能够为临床早期诊断提供敏感性强、准确性高的肿瘤标志物,同时为临床提供有效的治疗靶点。方法:1、通过qRT-PCR检测不同分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)临床前列腺癌组织和癌旁组织中lncRNA SNHG7和miR-503的表达量,验证lncRNA SNHG7、miR-503与前列腺癌的发生发展是否具有相关性。2、通过以下实验方法比较三种不同来源的前列腺癌细胞增殖、凋亡以及其他细胞表型:CCK8细胞增殖实验检测细胞活力;平板克隆检测细胞克隆形成率;Transwell实验检测三种前列腺癌细胞侵袭能力;细胞划痕(ibidi插件)实验检测三种前列腺癌细胞迁移能力;Annexin V-FITC/PI双染法流式检测细胞凋亡;qRT-PCR检测lncRNA SNHG7、miR-503的表达。3、在PC-3细胞中过表达/干扰lncRNA SNHG7,分别通过平板克隆实验检测细胞克隆形成率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡;PI单染检测细胞周期;ki67与DAPI免疫荧光双染法测定细胞增殖;测定肿瘤细胞血管生成实验;qRT-PCR检测lncRNA SNHG7与miR-503的表达。从而探究lncRNA SNHG7在体外对前列腺癌细胞PC-3的增殖、周期、凋亡以及细胞表型的影响。4、我们应用lncRNA SNHG7过表达与干扰的慢病毒感染PC-3细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞株。应用稳定转染的细胞株移植于裸鼠皮下建立皮下成瘤的动物模型。通过测量瘤体组织的体积和重量以及免疫组化检测ki67的表达与分布研究lncRNA SNHG7在体内对肿瘤增殖的影响。5、通过RIP实验研究lncRNA SNHG7、miR-503与AG02结合形成三元复合物,进一步通过双荧光素酶实验研究lncRNA SNHG7与miR-503相互作用。根据文献报道PI3K是miR-503的靶蛋白,我们通过过双荧光素酶实验进一步验证这一结论。6、为了验证lncRNA SNHG7是通过抑制靶基因miR-503从而对前列腺癌的增殖、凋亡和细胞表型产生影响,我们恢复前列腺癌细胞PC-3细胞中miR-503的表达,分别通过平板克隆实验检测细胞克隆形成率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡;PI单染检测细胞周期;ki67与DAPI免疫荧光双染法测定细胞增殖;细胞划痕(ibidi插件)实验检测细胞迁移能力;transwell实验检测细胞侵袭能力;测定肿瘤细胞血管生成实验。7、为了研究lncRNA影响前列腺癌细胞表型变化的分子机制,我们改变lncRNA SNHG7和miR-503的表达水平,通过WB检测PI3-K/Akt信号通路与细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭相关蛋白的表达。结果:1、lncRNA SNHG7在前列腺癌组织中表达量上调,其中Ⅲ期上调最显著,Ⅱ期次之;miR-503在前列腺癌组织中表达量下调,其中Ⅲ期下调最显著,Ⅱ期次之。2、lncRNA SNHG7在PC-3细胞中表达量最高,miR-503在PC-3细胞中表达量最低。同时,PC-3细胞增殖、迁移、侵袭能力最强,细胞凋亡水平最低。3、在体外,上调lncRNA SNHG7可促进前列腺癌细胞PC-3增殖、迁移和侵袭,抑制凋亡。4、在体内,上调lncRNA SNHG7可促进前列腺癌瘤体增殖,抑制其凋亡。5、lncRNA SNHG7和miR-503与AG02蛋白结合成为三元复合物。lncRNA SNHG7通过靶向抑制miR-503调节其靶基因PI3K的表达。6、lncRNA SNHG7对肿瘤细胞增殖、凋亡以及细胞表型的影响是通过抑制miR-503来实现的。7、lncRNA SNHG7靶向抑制miR-503进而通过激活PI3K/AKT相关通路影响肿瘤细胞增殖、凋亡以及其他细胞表型。结论:1、前列腺癌中lncRNA SNHG7和miR-503表达异常与前列腺癌的发生发展相关。前列腺癌恶性程度越高,lncRNA SNHG7表达量越高,miR-503表达量越低。2、lncRNA SNHG7促进前列腺癌增殖、迁移和侵袭、抑制凋亡。3、lncRNA SNHG7通过靶向抑制miR-503调节其靶基因PI3K的表达。lncRNA SNHG7对肿瘤细胞增殖、凋亡以及细胞表型的影响是通过抑制miR-503来实现的。4、lncRNA SNHG7靶向抑制miR-503从而激活PI3K/AKT信号通路影响肿瘤细胞增殖、凋亡以及其他细胞表型。