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目的:女性生殖系统常见的恶性肿瘤包括卵巢癌、宫颈癌和子宫内膜癌,根据2013年美国癌症协会调查显示,在这三大恶性肿瘤中,卵巢癌死亡率最高,究其根本原因还是对卵巢癌分子发病机制认识不足。卵巢上皮性肿瘤并非单一疾病,而是包括多种组织学类型,且不同组织学类型之间在多方面都存在显著差异。单独以卵巢癌最常见的组织学类型卵巢高级别浆液性腺癌作为研究对象,排除不同级别、不同组织学类型对卵巢癌的影响,能更准确的反应其发生和发展的客观过程,为临床更准确判断预后提供可靠依据。最新研究表明,卵巢浆液性腺癌中普遍存在DNA修复机制缺陷,APE1/Ref-1和NPM1是DNA修复机制中两个重要基因,且APE1/Ref-1残基Lys27/31/32/35与NPM1 N端的寡聚区存在相互作用,这不仅可以显著的降低APE1/Ref-1在碱基切除修复中的活性,而且还可以促进肿瘤细胞的增殖。本研究以卵巢高级别浆液性腺癌组织为实验组,正常输卵管组织为对照组,利用免疫组织化学方法检测APE1/Ref-1和NPM1蛋白在两种组织中表达情况,分析两者与卵巢高级别浆液性腺癌发生、进展、化疗耐药和预后的关系,筛选影响卵巢高级别浆液性腺癌预后的相关因素及各因素的预测价值,进一步确定独立预后因素。方法:1研究对象选取2003年7月至2009年1月河北医科大学第二医院临床资料和随访记录完整,术前未给予任何治疗、经手术切除并经病理证实的卵巢高级别浆液性腺癌50例作为实验组,因其他良性疾病切除的正常输卵管20例作为对照组。2免疫组织化学严格按照免疫组织化学三步法检测APE1/Ref-1、NPM1和PCNA指标蛋白表达情况。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照,以已知上述基因强阳性表达的组织切片作为阳性对照。3生存分析对50例卵巢高级别浆液性腺癌患者进行随访并总结分析,分别以36个月和60个月作为截止点,通过比较50例卵巢高级别浆液性腺癌患者3年和5年的生存率,筛选卵巢高级别浆液性腺癌预后因素和各自预测价值,确定独立预后因素。4统计学处理及分析采用SPSS13.0软件进行统计学分析,计数资料采用行×列表的x2检验,等级资料采用Mann-Whitney秩和检验,各指标之间的相关关系采用Spearman等级相关分析,Kaplan-Meier单因素生存分析和Log-Rank检验筛选预后相关因素,Cox多因素生存分析判断独立预后因素及各因素的预测价值,确定各因素风险系数。检验水准α=0.05。结果:1 APE1/Ref-1、NPM1和PCNA蛋白在卵巢高级别浆液性腺癌中的表达情况1.1 APE1/Ref-1蛋白表达根据免疫组化结果判定(以细胞浆出现棕黄色染色颗粒为阳性表达),APE1/Ref-1蛋白在50例卵巢高级别浆液性腺癌和20例正常输卵管组织中阳性表达率分别为98%和0%。统计学分析表明,卵巢高级别浆液性腺癌中APE1/Ref-1蛋白阳性表达率明显高于正常输卵管组织,差异有统计学意义(P<0.05)。1.2 NPM1蛋白表达根据免疫组化结果判定(以细胞浆出现棕黄色染色颗粒为阳性表达),NPM1蛋白在50例卵巢高级别浆液性腺癌和20例正常输卵管组织中阳性表达率分别为96%和0%。统计学分析表明,卵巢高级别浆液性腺癌中NPM1蛋白阳性表达率明显高于正常输卵管组织,差异有统计学意义(P<0.05)。1.3 PCNA蛋白表达根据免疫组化结果判定,PCNA蛋白在50例卵巢高级别浆液性腺癌和在20例正常输卵管组织中的高表达(核增殖指数>40%)率分别为68%和10%。统计学分析表明,卵巢高级别浆液性腺癌PCNA蛋白高表达率明显高于正常输卵管组织,差异有统计学意义(P<0.05)。2 APE1/Ref-1和NPM1蛋白表达与卵巢高级别浆液性腺癌临床病理特征的关系APE1/Ref-1和NPM1蛋白表达水平在卵巢高级别浆液性腺癌的年龄、家族史、腹水中的差异无统计学意义(P>0.05);淋巴结转移、远处转移和化疗不敏感组APE1/Ref-1和NPM1蛋白表达水平高于无淋巴结转移、无远处转移和化疗敏感组,FIGO分期晚期(ⅢⅣ)卵巢高级浆液性腺癌APE1/Ref-1和NPM1蛋白表达水平高于早期(ⅠⅡ)高级别浆液性腺癌,且差异均有统计学意义(P<0.05)。3卵巢高级别浆液性腺癌中APE1/Ref-1、NPM1和PCNA蛋白表达的相关性3.1 APE1/Ref-1和PCNA蛋白表达的相关性卵巢高级别浆液性腺癌APE1/Ref-1蛋白高表达(++和+++)32例中PCNA蛋白高表达(核增殖指数>40%)28例,提示APE1/Ref-1和PCNA蛋白表达呈正相关(r=0.797 P<0.05)。3.2 NPM1和PCNA蛋白表达的相关性卵巢高级别浆液性腺癌NPM1蛋白高表达(++和+++)32例中PCNA蛋白高表达(核增殖指数>40%)28例,提示NPM1和PCNA蛋白表达呈正相关关系。(r=0.736 P<0.05)。3.3 NPM1和APE1/Ref-1蛋白表达的相关性卵巢高级别浆液性腺癌APE1/Ref-1蛋白高表达(++和+++)32例中NPM1蛋白高表达(++和+++)27例,提示APE1/Ref-1和NPM1蛋白表达呈正相关关系。(r=0.730 P<0.05)。4 APE1/Ref-1和NPM1蛋白表达与卵巢高级别浆液性腺癌预后的关系结合免疫组化结果,对50例卵巢高级别浆液性腺癌患者进行随访分析,APE1/Ref-1蛋白低表达组和高表达组3年和5年的生存率分别为(83.33%、38.89%)和(18.75%、0%),APE1/Ref-1蛋白高表达组患者的3年和5年生存率均低于低表达组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。NPM1蛋白低表达组和高表达组3年和5年的生存率分别为(88.89%、38.89%)和(15.63%、0%),NPM1蛋白高表达组患者的3年和5年生存率均低于低表达组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。5卵巢高级别浆液性腺癌的预后多因素分析结果采用Kaplan-Meier单因素生存分析和Log-Rank检验,结果显示,淋巴结转移、远处转移、化疗耐药、FIGO分期晚期(ⅢⅣ)、APE1/Ref-1和NPM1高表达组患者的3年和5年生存率分别低于无淋巴结转移、无远处转移、化疗敏感、FIGO分期早期(ⅠⅡ)、APE1/Ref-1和NPM1低表达组患者,且差异有统计学意义(P<0.05),证明淋巴结转移、远处转移、化疗耐药、FIGO分期、APE1/Ref-1和NPM1是影响卵巢高级别浆液性腺癌预后的因子。采用COX比例风险回归模型检验,结果显示APE1/Ref-1和NPM1是影响卵巢高级别浆液性腺癌的独立预后因素,且APE1/Ref-1影响程度大于NPM1。结论:1 APE1/Ref-1和NPM1蛋白在卵巢高级别浆液性腺癌中表达发生亚细胞定位改变,提示APE1/Ref-1和NPM1蛋白亚细胞定位改变参与了卵巢高级别浆液性腺癌的发生。2 APE1/Ref-1和NPM1蛋白表达与卵巢高级别浆液性腺癌患者淋巴结转移、远处转移、FIGO分期、化疗耐药有关,提示两者可能参与了卵巢高级别浆液性腺癌进展、侵袭转移和化疗耐药。3 APE1/Ref-1和NPM1蛋白表达与PCNA蛋白表达呈正相关关系,提示APE1/Ref-1和NPM1与细胞增殖活动相关。4 APE1/Ref-1和NPM1蛋白在卵巢高级别浆液性腺癌中的表达呈正相关关系,提示两者在卵巢高级别浆液性腺癌的发生和进展中起到协同作用。5卵巢高级别浆液性腺癌APE1/Ref-1和NPM1蛋白高表达组患者的3年和5年生存率明显低于低表达组患者,提示除传统的预后因素外,APE1/Ref-1和NPM1蛋白表达也是影响卵巢高级别浆液性腺癌的预后相关因素,而且是独立的预后因素,可能成为卵巢高级别浆液性腺癌基因治疗的新靶点。