【摘 要】
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在临床上,胸腺素α1和干扰素α-2b联合使用,在治疗多种病毒性疾病以及肿瘤中得到了广泛的应用.由于胸腺素α 1和干扰素α-2b在功能上具有相互促进的作用,它们的融合可能产生
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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在临床上,胸腺素α1和干扰素α-2b联合使用,在治疗多种病毒性疾病以及肿瘤中得到了广泛的应用.由于胸腺素α 1和干扰素α-2b在功能上具有相互促进的作用,它们的融合可能产生一种具有双重活性,或者高于原来各自活性的高活性重组蛋白.基于这些认识,我们尝试了采用基因工程的方法构建胸腺素α 1/干扰素α-2b融合蛋白,并对其生物学活性进行了初步的研究.使用大肠杆菌偏爱的密码子对胸腺素α 1基因进行了优化设计,用嵌套式PCR方法得到了干扰素α-2b基因,将两个基因用具有高度柔性的Gly-Ala-Ala-Ala-Gly连接肽的编码序列连接起来,克隆到表达载体中.测序结果表明,构建的表达载体中的外源基因的序列与理论设计的基因序列完全一致.融合蛋白基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达产物以包涵体形式存在.包涵体蛋白经过强阴离子交换柱Q Sepharose H.P.柱层析和Sephacryl S-200分子筛柱纯化、透析复性、EK酶酶切、Sephacryl S-200分子筛柱再纯化,获得了95%以上纯度的复性融合蛋白.经体外实验检测,该蛋白具有胸腺素α 1和干扰素α-2b双重活性.本研究成功构建了融合蛋白表达载体,并获得了高效表达.对纯化方案进行了初步的探索.在体外对融合蛋白的生物学活性进行了初步的研究.为该融合蛋白的进一步应用研究打下了良好的基础.
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