血管生成是正常组织的发育和生长的一个必须过程,在生理条件下,除了创伤修复和女性子宫周期性变化外,成人几乎是不存在血管生成的,然而在病理状态下许多疾病的发生都伴随着血管的生成。1970年,FolkMan就提出了“肿瘤生长依赖于血管生成”的概念。进一步的研究表明肿瘤细胞可以分泌多种具有促进血管生成的细胞因子和生长因子,其中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体(VEGFR)被证明在肿瘤血管形成过程中起关键的作用。VEGF不但能够促进血管的生成,而且能够增加血管的通透性,促进肿瘤转移。 RNA干扰(RNA interference)是指由双链RNA诱发对宿主细胞特异性RNA的降解,从而抑制目的基因的表达。近年来通过RNAi技术抑制VEGF表达从而抑制肿瘤血管生成成为肿瘤药物开发研究的热点。本论文主要研究了针对VEGF的小分子RNA(siRNA)的抑制效果,在细胞表达水平和以胚胎发育体系为代表的动物模型对针对VEGF的siRNA做了深入研究。 本研究利用脂质体将以VEGF为靶向的siRNA体内表达质粒转染小细胞肺癌细胞系A549,24小时后用Western blot技术检测VEGF在蛋白水平表达量的变化,用实时荧光定量PCR技术检测(Real Time RT-PCR)VEGFmRNA水平的量的变化,以确定siRNA对VEGFmRNA的抑制效果；同时将质粒注射鸡胚,验证siRNA在体内通过抑制VEGF的表达,抑制鸡胚发育期血管的生成的效果。 研究的结果显示,转染siRNA后A549细胞的VEGF在蛋白水平和mRNA水平的表达量均有不同程度的降低,其中A-4在mRNA水平抑制率达70％。在鸡胚动物模型试验中,鸡胚的血管密度明显减少甚至导致鸡胚的死亡。本论文的实验结果表明应用小分子RNA干扰技术可以特异有效的抑制VEGF表达和血管生成,为应用“肿瘤饥饿法”治疗肿瘤提供了科学数据,为肿瘤药物的开发提供了基础。