【摘 要】
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目的:以体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,研究转录因子snail(SNAI1)基因沉默对MCF-7细胞生物学表型的影响。方法:针对SNAI1基因序列设计shRNA,并与表达绿色荧光蛋白(G
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目的:以体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,研究转录因子snail(SNAI1)基因沉默对MCF-7细胞生物学表型的影响。方法:针对SNAI1基因序列设计shRNA,并与表达绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)的真核表达载体pGCsilencerTMU6/Neo/GFP连接,转染MCF-7细胞并进行G418筛选,获得质粒相对稳定表达的细胞;通过RT-PCR鉴定SNAI1基因mRNA水平沉默效果;细胞免疫荧光检测SNAI1基因蛋白水平沉默效果及表达定位的改变;倒置显微镜观察细胞形态的改变;细胞计数法检测细胞的增殖能力;细胞划痕法检测细胞的体外迁移能力;Boyden小室法检测细胞的体外侵袭能力;RT-PCR检测上皮标记物claudin-4、claudin-6、claudin-7、E-cadherin和间质标记物MMP-2表达水平的改变。结果:SNAI1基因沉默组相对于对照组细胞形态发生改变;细胞增殖、迁移能力及侵袭能力减弱;细胞的上皮标志物claudin-4、claudin-7、E-cadherin表达升高,间质标志物MMP-2表达降低。结论:SNAI1基因沉默可以抑制MCF-7细胞的恶性表型,并通过其相关靶基因的调控逆转EMT过程。
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