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蓝氏贾第虫是一种呈世界性分布的人畜共患寄生虫,常寄生于人和犬猫等多种哺乳动物的十二指肠,可引起以腹泻为主的贾第虫病。本研究以流浪犬猫贾第虫为研究对象,选取tpi与bg基因作为遗传标记,通过PCR扩增对其分离株进行基因型鉴定,对广东省不同地区、不同年龄和不同性别流浪犬猫的贾第虫感染情况以及优势基因型进行调查。同时,以bg基因作为靶基因,建立广东猫源贾第虫常见基因型的Tm-shift分型方法,为猫源贾第虫的分子检测与流行病学调查提供新的技术手段。1.犬的贾第虫分子流行病学调查。对广东省四个地区(汕头、佛山、韶关和深圳)527份犬的粪样进行镜检,并以tpi和bg基因作为遗传标记,对其分离株进行PCR扩增、克隆、测序及序列分析。结果显示,犬的贾第虫总感染率为10.8%(57/527),扩增的tpi和bg基因片段分别为334 bp和511 bp;系统进化树显示,25株犬源贾第虫被tpi基因成功分型,其中24株为AI型,1株为D型;57株犬源贾第虫被bg基因分型,其中26株为AI型,18株为C型,13株为D型。在不同年龄组中,低龄犬感染的贾第虫优势基因型为AI型,成年犬为C型,仅在低龄犬中发现混合感染情况。在不同性别组中,公犬感染的贾第虫优势基因型为C型,母犬为AI型,公母犬均有混合感染情况。在不同地区组中,汕头、深圳、韶关地区犬感染的贾第虫为AI、C和D型,佛山地区为AI和D型;除了韶关外,其他地区均有贾第虫混合感染情况。2.猫的贾第虫分子流行病学调查。对广东省三个地区(汕头、韶关和中山)104份猫的粪样进行镜检,并以tpi和bg基因作为遗传标记,对其分离株进行PCR扩增、克隆、测序及序列分析。结果显示,猫的贾第虫总感染率为5.8%(6/104),扩增的tpi和bg基因片段分别为334 bp和511 bp;系统进化树显示,6株猫源贾第虫被tpi基因成功分型,其中6株为AI型;6株猫源贾第虫被bg基因分型,其中3株为AI型,3株为F型。在不同年龄组中,低龄组与成年组均发现贾第虫混合感染情况。在不同性别组中,公母猫均发现贾第虫混合感染情况。在不同地区组中,除韶关外,汕头和中山均有混合感染情况。3.猫源贾第虫Tm-shift分型方法的建立。选取bg基因作为靶基因,基于该基因的两个SNP位点(BG434和BG170)设计特异性引物,并在两条引物5’端加入不同长度的GC序列,根据PCR扩增后熔解曲线Tm值的差异进行基因分型,并进行了重复性、敏感性、准确性试验和临床检测。结果显示,基于2个SNP位点设计的两组引物均能对猫源贾第虫A型与F型进行准确分型;两组引物A型与F型Tm值的变异系数(CV)分别为0.14%与0.07%和0.10%与0.11%;当A型和F型样品稀释至1:106(即4.52×10-5 ng/μL和4.88×10-5ng/μL)时,Tm-shift方法仍可检出基因型;针对10个已知基因型的猫源贾第虫DNA样品,Tm-shift分型结果完全一致;对临床样品的检出率明显高于镜检,准确率与测序结果一致。结果表明,广东地区流浪犬猫的贾第虫存在人畜共患的风险,需要引起重视并采取必要的防控措施,以保障人类健康。建立的Tm-shift分型方法快速、特异,可为猫源贾第虫的分子检测与流行病学调查提供新的技术手段。