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胃溃疡(Gastric ulcer,GU)可分为应激性胃溃疡(Stress gastric ulcer)和慢性胃溃疡(Chronic gastric ulcer)。随着我国经济快速发展带来的生理与心理的双重压力,应激性胃溃疡的发病率也呈上升趋势,临床表现为上腹部疼痛,吞酸、嗳气等症状,严重时可引发胃出血休克等。有研究指出,在应激状态下,抑炎因子与促炎因子的平衡遭到破坏,从而引发胃黏膜炎症反应继而导致应激性胃溃疡的发生。肠道菌群结构的改变可引发多种疾病,在应激状态下通过HPA轴使肠道菌群的结果及多样性发生变化,有文献研究,机体出现应激状态时可改变肠道菌群丰度和菌群的多样性,有大量文献证明针刺治疗可缓解应激性胃溃疡患者的痛苦进而达到治愈效果。关于应激性胃溃疡的发生对炎性因子含量及肠道菌群影响的研究较少,故本实验用改良版束缚—浸水法(Restraint water-immersion stress,RWIS)进行造模,观察针刺治疗前后应激性胃溃疡模型大鼠的炎性因子与肠道菌群的变化,基于此探讨针刺治疗应激性胃溃疡的可能机制。目的通过针刺“中脘”穴、双侧“足三里”穴,观察针刺对应激性胃溃疡(Stress-introduced gastric ulcer,SGU)大鼠血清中炎性因子及肠道菌群的影响,探讨针刺治疗SGU的机制。方法将28只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、药物组,每组7只。除空白组外,其余三组均采用束缚—浸水法制备SGU模型。造模后,空白组与模型组每日束缚20min,连续5d;针刺组针刺“中脘”及双侧“足三里”,留针20 min,每日1次,连续5 d;药物组给予0.2 mg/L的奥美拉唑肠溶片溶液2 mL灌胃,每日1次,连续5 d。用Guth法计算胃黏膜损伤指数,HE染色观察大鼠胃黏膜组织形态学改变,用ELISA法检测血清中白细胞介素IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量,用16SrDNA测序法检测肠道菌群变化。结果(1)大鼠胃黏膜损伤指数:与空白组相较,模型组大胃黏膜损伤指数明显升高(P<0.01)。与模型组相较,针刺组和药物组大鼠胃黏膜损伤指数明显降低(P<0.01,P<0.05)。两治疗组组间相较,针刺组胃黏膜损伤指数低于药物组(P<0.05)。(2)大鼠胃黏膜形态学变化:与空白组相较,模型组大鼠胃黏膜损伤严重,腺体排列混乱,充血严重,红细胞大量渗出;与模型组相比,针刺组大鼠胃黏膜大部分较完整,红细胞少量渗出,有部分细胞坏死;药物组大鼠胃黏膜结构相对完整,红细胞少量渗出,细胞坏死。(3)大鼠血清中IL-4、IL-6、TNF-α含量:与空白组相比,模型组血清IL-4含量均明显降低(P<0.01),IL-6、TNF-α含量均明显升高(P<0.01);与模型组相较,针刺组和药物组大鼠血清IL-4含量均明显升高(P<0.01,P<0.05),IL-6、TNF-α均明显降低(P<0.01,P<0.05)。(4)大鼠肠道菌群分析1)Alpha多样性分析:Observed Species指数,与空白组相较,模型组大鼠肠道菌群丰度指数降低(P<0.05),与模型组相较,针刺组大鼠肠道菌群丰度指数升高(P<0.05),药物组大鼠肠道菌群丰度指数有上升趋势(P>0.05),两治疗组之间无统计学差异(P>0.05);Shannon Wiener指数,与空白组相较,模型组大鼠肠道菌群多样性降低(P<0.05),与模型对照组相较,针刺组大鼠肠道菌群多样性有升高(P<0.05),药物组大鼠肠道菌群多样性有上升趋势(P>0.05),两治疗组之间(P<0.05)。2)Beta多样性分析:基于Binary Jaccard距离算法对肠道菌群进行(principal co-ordinates analysis,PCoA)分析,空白组较为集中,模型组、针刺组及药物组分布范围较散,分界不清晰,但针刺组与药物组与空白组较接近,根据非参数多元方差分析F值为1.3261、P值为0.041(P<0.05)各组大鼠肠道菌群间差异有统计学意义。3)物种的注释与评估:在门分类水平中各组大鼠肠道菌群主要由拟杆菌门、厚壁菌门构成。与空白组相较,模型组大鼠拟杆菌门比例有下降趋势,厚壁菌门比例有上升趋势(P>0.05);与模型组相较,针刺组大鼠拟杆菌门比例上升,厚壁菌门比例有下降趋势,药物组大鼠拟杆菌门比例有上升趋势,厚壁菌门比例有下降趋势(P>0.05);在属分类水平,与空白组相较,模型组大鼠大肠埃希菌属比例有明显上升,乳酸杆菌属有下降趋势(P>0.05);与模型组相较,针刺组大鼠大肠埃希菌属比例均有下降,乳酸杆菌属比例升高;药物组大鼠大肠埃希菌属比例均有下降趋势(P>0.05)。结论(1)采用束缚—浸水法造模,可以导致大鼠胃黏膜损伤,造成应激性胃溃疡(2)大鼠造模成功后,可破坏炎性因子平衡和肠道菌稳态。(3)针刺“中脘”穴、双侧“足三里”穴可降低IL-6、TNF-α含量、升高IL-4含量,调节炎性因子含量,减少溃疡面积。(4)造模后大鼠门分类拟杆菌门降低、厚壁菌门升高组成,属分类大肠埃希菌属比例有明显上升,乳酸杆菌属有明显下降,针刺干预后大鼠肠道菌群趋于正常水平,益生菌数量增加。(5)针刺“中脘”穴、双侧“足三里”穴,能够调整大鼠肠道菌群数量与种类的分布,使其趋于正常水平,增加肠道菌群多样性、降低有害菌数量提高益生菌数量。综上所述,针刺中脘穴、双侧足三里穴治疗胃溃疡,可以有效减轻胃黏膜损伤,平衡相关炎性因子的含量,调节紊乱的肠道菌群,修复损伤的胃粘膜。