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目的:以逼尿肌无力大鼠为研究对象,采用电针次髎、会阳穴治疗,动态角度观察(电针治疗后2小时、24小时、48小时、72小时)电针的效应。并且借助PCR、Westernblot、钙离子成像等技术,观察电针对膀胱ICCs HCN通道各亚型以及ICCs内钙离子震荡特征的影响,结合尿动力学检测和离体逼尿肌肌条牵拉实验,揭示电针调节逼尿肌无力的效应靶点和作用机制。方法:SPF级雌性Wistar大鼠160只,随机分为假手术组、模型组、电针组、药物组。采用液氮冻伤方法建立逼尿肌无力大鼠模型。假手术组:不做造模处理,仅给予开腹后缝合;模型组:逼尿肌无力造模成功后不予治疗;电针组:逼尿肌无力造模成功后,予电针次髎、会阳穴;药物组:逼尿肌无力造模成功后,予皮下注射0.1%新斯的明0.02ml,每日2次。以上各组除药物组皮下注射0.1%新斯的明0.02ml,每日2次以外,其它三组均予皮下注射同样剂量生理盐水;除电针组每日电针治疗20分钟以外,其它三组均同样每日捆绑20分钟。为了进行动态观察,每组又随机分为4小组(对应不同时段:处理后2h、24h、48h、72h)。每小组10只。采用尿动力检测技术分析膀胱动力学特征,离体逼尿肌条牵拉实验分析膀胱离体逼尿肌条收缩性,PCR及Westernblot法分析膀胱逼尿肌ICCs HCN通道m RNA及蛋白的表达变化,钙离子成像技术观察膀胱ICCs内钙离子震荡特征变化。结果:1.尿动力变化:(1)采用液氮冻伤方法建立逼尿肌无力大鼠模型,尿动力学表现为膀胱容量、残余尿量较假手术大鼠增加(P<0.05),平均排尿速度较假手术大鼠降低(P<0.05),说明该模型建立成功,可用于逼尿肌无力疾病的相关研究;(2)经过电针治疗后2h、24h、48h、72h,逼尿肌无力大鼠膀胱容量、残余尿量均较模型组降低(P<0.05);经过电针治疗后2h、24h,大鼠平均排尿速度较模型组升高(P<0.05),而治疗后48h、72h,电针对逼尿肌无力大鼠平均排尿速度没有影响(P>0.05),且电针治疗后2h大鼠平均排尿速度高于其他三个时间段(P<0.05);(3)经过皮下注射新斯的明后2h、24h、48h、72h,逼尿肌无力大鼠膀胱容量、残余尿量均较模型组降低(P<0.05);经过皮下注射新斯的明后2h、24h、48h,大鼠平均排尿速度较模型组升高(P<0.05),而治疗后72h皮下注射新斯的明对逼尿肌无力大鼠平均排尿速度没有影响(P>0.05)。2.膀胱离体逼尿肌条收缩性变化:(1)逼尿肌无力模型组大鼠离体逼尿肌条收缩幅度和频率均低于假手术组(P<0.05);(2)电针治疗后2h、24h和48h,逼尿肌无力大鼠离体逼尿肌条收缩幅度较模型组升高(P<0.05),治疗后72h电针对逼尿肌无力大鼠离体逼尿肌条收缩幅度没有影响(P>0.05),且电针治疗后2h离体逼尿肌条收缩幅度大于其他三个时间段(P<0.05);电针治疗后2h、24h,逼尿肌无力大鼠离体逼尿肌条收缩频率较模型组升高(P<0.05),治疗后48h、72h,电针对逼尿肌无力大鼠离体逼尿肌条收缩频率没有影响(P>0.05);(3)经过皮下注射新斯的明后2h、24h逼尿肌无力大鼠离体逼尿肌条收缩幅度较模型组升高(P<0.05),治疗后48h、72h,皮下注射新斯的明对逼尿肌无力大鼠离体逼尿肌条收缩幅度没有影响(P>0.05);经过皮下注射新斯的明后2h、24h和48h,逼尿肌无力大鼠离体逼尿肌条收缩频率较模型组升高(P<0.05),治疗后48h和72h,皮下注射新斯的明对逼尿肌无力大鼠离体逼尿肌条收缩频率没有影响(P>0.05)。3.膀胱ICCs内钙离子震荡特征变化:(1)逼尿肌无力模型组大鼠膀胱ICCs内钙离子震荡的幅度和频率均较假手术组大鼠降低(P<0.05);(2)经过电针治疗后2h,逼尿肌无力大鼠膀胱ICCs内钙离子震荡的幅度和频率均较模型组升高(P<0.05);(3)经过皮下注射新斯的明后2h,逼尿肌无力大鼠膀胱ICCs内钙离子震荡的幅度和频率均较模型组升高(P<0.05)。4.ICCs HCN通道各亚型m RNA及蛋白表达变化:(1)假手术组大鼠膀胱组织中存在ICCs HCN通道四个亚型的m RNA和蛋白表达,逼尿肌无力大鼠膀胱ICCs HCN通道四个亚型的m RNA和蛋白表达均较假手术组下降(P<0.05);(2)电针可在治疗后2h、24h、48h和72h增加ICCs HCN1、HCN4 m RNA表达量(P<0.05),且电针治疗后2h HCN4 m RNA表达量改善最明显(P<0.05);电针在治疗后2h、24h、48h和72h对ICCs HCN2、HCN3 m RNA的表达没有影响(P>0.05);电针可在治疗后2h增加ICCs HCN1、HCN4蛋白表达量(P<0.05),电针在治疗后2h对ICCs HCN2、HCN3蛋白表达量没有影响(P>0.05);(3)皮下注射新斯的明可在治疗后2h、24h、48h和72h增加ICCs HCN1、HCN4 m RNA表达量(P<0.05),在治疗后2h、24h和48h增加ICCs HCN2m RNA表达量(P<0.05),且皮下注射新斯的明治疗后2h HCN1 m RNA表达量改善最明显(P<0.05)。皮下注射新斯的明在治疗后2h、24h、48h和72h对ICCs HCN3m RNA的表达没有影响(P>0.05);皮下注射新斯的明可在治疗后2h增加ICCs HCN1、HCN2、HCN4蛋白表达量(P<0.05),皮下注射新斯的明在治疗后2h对ICCs HCN3蛋白表达量没有影响(P>0.05)。结论:1.电针能改善离体逼尿肌条收缩功能,改善膀胱尿动力,从而有效减少逼尿肌无力大鼠膀胱容量和残余尿量,提高逼尿肌无力大鼠平均排尿速度和离体逼尿肌条收缩的幅度、频率。且电针的效应具有动态变化的特点,治疗后2h对逼尿肌无力大鼠平均排尿速度和离体逼尿肌条收缩幅度的改善效应最佳。2.电针可以上调ICCs HCN1和HCN4的表达,提高膀胱ICCs内钙离子震荡的幅度和频率,说明电针增强ICCs起搏通道HCN的表达及ICCs兴奋性是治疗逼尿肌无力的肌源性作用机制之一。