嗜肺军团菌血清10型信号标签诱变突变体文库构建

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目的: 本文通过PCR扩增特异信号标签,导入载体质粒pC6,构建信号标签诱变突变体文库穿梭质粒pC6RS;通过细菌结合配对时转座子的转座作用,使特异信号标签随机插入到嗜肺军团菌的基因组中,由此构建嗜肺军团菌血清10型信号标签诱变突变体文库,为筛选嗜肺军团菌血清10型毒力基因打下基础。包括二部分:1、信号标签诱变突变体文库穿梭质粒构建;2、嗜肺军团菌血清10型信号标签诱变突变体文库的建立。 方法: 实验一:信号标签诱变突变体文库穿梭质粒构建通过PCR扩增信号标签(signature tags,STs)片段,导入载体质粒pC6,构建重组质粒pC6RS,电穿孔转化到大肠杆菌CC118中,从CC118中提取重组质粒pC6RS后转化到大肠杆菌S17-1中,获得信号标签诱变突变体文库穿梭质粒。 实验二:嗜肺军团菌血清10型信号标签诱变突变体文库的建立 含重组质粒pC6RS的大肠杆菌S17-1与嗜肺军团茵L10结合配对,通过转座子的转座作用,将特意信号标签片段随机插入到军团菌的基因组中,通过营养依赖和抗性筛选建立嗜肺军团菌血清10型信号标签诱变突变体文库。 结果: 实验一:信号标签诱变突变体文库穿梭质粒构建通过PCR扩增信号标签(signature tags,STs)片段,导入载体pC6,构建重组质粒pC6RS,电穿孔转化
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