胆碱能神经元(cholinergic neuron)是能合成乙酰胆碱并且以乙酰胆碱(Ach)为递质的神经元,在体内的分布非常广泛。中枢神经系统中的胆碱能神经元与学习、记忆以及注意力密切相关。胆碱能神经元的病变会引起阿尔茨海默症等严重的神经退化性疾病。获得胆碱能神经元特异标记的细胞系,可以更好地了解胆碱能神经元的分化、生理生化特性及引起阿尔茨海默症等严重的神经退化性疾病的病理机制。然而,已有的能够特异性标记胆碱能神经元的细胞均为动物来源,缺乏相应的人来源的细胞系。为了获得特异性标记的胆碱能神经元人源细胞系,本文利用最新的基因编辑技术—CRISPR(Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats)/Cas9系统构建了由胆碱乙酰转移酶(Choline acetyltransferase,ChAT)基因内源性启动子驱动zsGreen的胆碱能神经元特异性标记的人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)。ChAT-zsGreen细胞系在ES阶段时具有干性且无绿色荧光蛋白表达,而当其分化成胆碱能神经元时,在胆碱能神经元中特异表达了绿色荧光蛋白。该细胞系的成功建立不仅为研究胆碱能神经元提供了新的实验材料,同时也为构建其他类似的特异标记细胞系提供了实验基础。