论文部分内容阅读
肿瘤是危及人们生命的“杀手”之一，因此及早的发现和治疗是非常重要的，但由于肿瘤早期的症状不是很明显，容易出现误诊和漏诊等问题。通常在肿瘤发生的4-8周前，血清或体液中的对氧磷酶的活性会显著增加或减少，因此，测定体液中的对氧磷酶（PON）的活性是诊断肿瘤的重要手段之一。测定对氧磷酶活性的方法有多种，但由于干扰因素和灵敏度的问题，能用于体液样品的测定方法却很少。目前文献多以紫外吸收光谱法测定酶的活性，该方法简单，但背景噪音大，并且生物体是一个极其复杂的体系，酶提取液中含有的其它吸光成分较多，紫外-可见分光光度法测定专一性不强，灵敏度也不高。而化学发光法不需要光源，背景噪音小，干扰少，测量时灵敏度高，用于测定酶的活性不需要对具有紫外吸收的干扰物进行分离。在本论文中，合成了三个吖啶酯类底物，以9-（4-对氯苯氧羰基）-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸盐（CPOCMA）为研究对象，采用化学发光法来测定血清中对氧磷酶的活性。底物CPOCMA是由发光基团和离去基团组成的。通过对其发光性能的研究发现，CPOCMA的化学发光属于瞬间发光，整个发光过程在20s内即可完成；引发剂可以影响CPOCMA的发光强度，当在0.1%H2O2与0.025mol/L HNO3和1.0mol/L NaOH与1.0×10-3mol/L CTAB的情况下，吖啶酯类底物的发光强度最大；吖啶酯类底物储存在2℃和25℃时，随着溶液的pH（6,7,8）的增大，试剂的稳定性变差。通过对CPOCMA的发光性能的研究，将其作为化学发光法测定血清中PON的活性的发光底物，对底物的特异性、方法的可靠性进行了研究。研究发现：化学发光的底物CPOCMA具有高效的化学发光效率，其浓度比紫外法测定PON活性的底物乙酰苯酯和二嗪农的浓度至少低1.0×10-5倍，且CPOCMA的用量少，成本低。此外，化学发光法测定PON的活性在生理的pH下就可完成。血清中的PON和人对氧磷酶催化CPOCMA水解的米氏常数（Km）分别为85nmol/L和83nmol/L，且二者很接近，这可能是受血清中其他酯酶的影响所致，例如脂肪酶和乙酰胆碱酯酶。激动剂氯化钠和氯化钙都可以提高rHuPON和血清中PON的活性，但是对血清中的乙酰胆碱酯酶和脂肪酶的活性没有影响，且在加入PON的激动剂氯化钙时，PON的活性是乙酰胆碱酯酶和脂肪酶的7.8倍。因此，PON的激动剂的加入提高了底物的特异性和灵敏度。我们分别以CPOCMA和二嗪农、乙酰苯酯为底物，对30个血清样品进行研究，通过化学发光法和紫外分光光度法两种方法的比较发现，30个血清样品在底物不同的情况下，血清中的PON所表现的催化作用的趋势相同，个别样品存在差异，可能是由于PON的多态性引起的。由此可知，以CPOCMA为底物，通过化学发光法测定血清中的PON的活性的方法是可靠的。